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牛传染性鼻气管炎是由牛传染性鼻气管炎病毒也称牛疱疹病毒Ⅰ型引起牛的一种急性、热性、接触性传染病，临床症状有上呼吸道及气管粘膜发炎，并伴有结膜炎、流产、乳腺炎等。更严重的危害是持续性感染，使得该病的诊断、预防及治疗极为困难。该病的现场诊断中，现有的抗体检测方法存在许多弊端，因此建立一种快速、简便、准确的抗体检测方法非常必要。 本研究根据GenBank中已公布的牛传染性鼻气管炎病毒的全基因序列，利用DNAstar对牛传染性鼻气管炎病毒的主要抗原糖蛋白gB进行预测分析，选出3段抗原指数高的氨基酸序列对应的基因片段gBa、 gBb和gBc，将3段基因序列融合后合成得到重组克隆载体PUCK-gBabc。将融合基因gBabc定向插入到原核表达载体pET-28a(+)中成功构建了重组原核表达载体pET28a-gBabc，并将其转化入大肠杆菌化学感受态细胞BL21(DE3)pLysS中，IPTG诱导表达。通过SDS-PAGE电泳鉴定发现，重组阳性菌诱导2h后融合蛋白表达量最大，其分子大小约为44.3kDa(含3.5kDa的pET-28a(+)肽段）。经Weatern blot鉴定证实融合蛋白具有良好的免疫学活性。 纯化后的融合蛋白gBF经透析复性作为检测线上的包被抗原，划线浓度为0.6mg/mL。质控线上用提纯的兔IgG作为捕获蛋白，划线浓度最终确定为1.5mg/mL。SPA用15NM的胶体金溶液标记，标记PH设为6.0，SPA标记浓度控制在0.1mg/mL，最后得到金标-SPA浓缩液，使用前用复溶缓冲液5倍稀释后涂覆在金标垫上。划线好的NC膜及处理好金标垫和样品垫放于37℃培养箱中烘干30min，切条后装卡槽，制成用于检测牛传染性鼻气管炎抗体的胶体金免疫层析试纸条。用牛传染性鼻气管炎标准阳性血清和阴性血清对本试验制备的检测试纸条进行有效性验证，结果在检测牛传染性鼻气管炎标准阳性血清时，出现两条红色反应带，呈阳性反应，检测阴性血清时只在质控线处出现红色反应条带，呈阴性反应，表明验证结果正确;交叉试验结果证明制备的试纸条与牛副结核病、牛布鲁菌病、牛病毒性腹泻和牛口蹄疫的阳性血清均无交叉反应;用牛传染性鼻气管炎ELISA抗体检测试剂盒与制备的检测试纸条同时对22份疑似IBR的血清进行检测，依据检测结果计算出两种检测方法的Kappa系数为0.699，说明两种检测方法有较好的一致性。使用制备的试纸条10min即可得到检测结果，制备的检测试纸条具有灵敏、特异的优点，且操作简便，适用于临床现场检测。