枸杞类胡萝卜素的生物可及性和转运机制研究

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目的类胡萝卜素(Carotenoids)是一类天然色素,与某些疾病如癌症、黄斑变性以及心血管和神经退行性疾病的发生发展有关。但人类自身无法合成类胡萝卜素,只能通过饮食来补充类胡萝卜素。营养物质被人体摄入后,在到达靶器官发挥其作用之前需要经历消化道(包括口腔、胃部、肠道等)的消化过程。因此研究不同食品中的营养物质的生物利用度可及性是研究开发和高效利用其营养价值的前提和基础。目前关于枸杞类胡萝卜素(LBC)的研究主要集中于其生物活性及作用机制,缺乏关于LBC的生物可及性和肠道摄取转运的相关基础研究,这为LBC的食品药品深度开发产生了阻碍。因此本研究拟通过体外模拟消化及Caco-2细胞单层模型,探究LBC的生物可及性和转运机制,从而为LBC的产品开发、有效利用提供依据。方法1.采用体外模拟消化对LBC在人体消化道中的消化过程进行研究,考察模拟消化过程中LBC的变化情况及生物可及性;2.构建Caco-2单层细胞模型,验证模型的完整性及紧密性,以Caco-2单层细胞模型模拟小肠吸收,探索LBC在不同时间、不同消化液浓度下在肠上皮细胞中的摄取转运机制。结果1.LBC中含有β-胡萝卜素、隐黄素、叶黄素、玉米黄素及玉米黄素二棕榈酸酯,其中β-胡萝卜素为主要成分,玉米黄素次之。2.LBC在消化阶段形成胶束,以胶束形式到达肠上皮细胞。胶束化主要发生在胃和肠消化阶段,玉米黄素及玉米黄素二棕榈酸酯从胃消化阶段开始逐渐形成胶束以待被肠细胞吸收,β-胡萝卜素、叶黄素和β-隐黄素从肠消化阶段开始形成胶束以待吸收。3.较低浓度的β-胡萝卜素在Caco-2细胞模型中的摄取具有时间依赖性,较高浓度时β-胡萝卜素的摄取量在孵育90 min后达到饱和,且摄取量随着浓度升高呈曲线变化。玉米黄素二棕榈酸酯在Caco-2细胞模型中的摄取量随浓度升高而增加,当消化液浓度为100%和25%时,其摄取量具有时间依赖性。玉米黄素在Caco-2细胞单层模型中的摄取具有时间依赖性且随着浓度越高摄取量越高。4.在Caco-2细胞模型的顶端侧至基底侧的转运中,β-胡萝卜素、玉米黄素和玉米黄素二棕榈酸酯的转运量表现出时间依赖性增高;不同浓度下孵育相同时间,β-胡萝卜素和玉米黄素的转运量随浓度的升高而增加,而玉米黄素二棕榈酸酯的转运量随浓度升高略降低;5.在Caco-2细胞模型的基底侧至顶端侧的转运中,较高浓度的玉米黄素和较低浓度的玉米黄素二棕榈酸酯在该侧的转运无时间依赖性,且β-胡萝卜素、玉米黄素、玉米黄素二棕榈酸酯的转运量随浓度的升高而增加。6.双向跨膜转运的表观渗透系数Papp与外排率ER表明β-胡萝卜素、玉米黄素、玉米黄素二棕榈酸酯能够被Caco-2细胞摄取转运,为中等吸收物质。结论1.进入人体的LBC可以从枸杞中释放出来,从而被人体吸收而发挥其生物活性,各类胡萝卜素的生物可及性由高至低分别为:β-隐黄素、β-胡萝卜素、玉米黄素、玉米黄素二棕榈酸酯、叶黄素。2.LBC进入人体后以胶束形式到达肠上皮细胞。胶束化主要发生在胃肠消化阶段。其中叶黄素、玉米黄素、玉米黄素二棕榈酸酯主要在胃肠消化阶段胶束化,β-胡萝卜素和β-隐黄素主要在肠消化阶段形成胶束。3.β-胡萝卜素、玉米黄素、玉米黄素二棕榈酸酯能够被Caco-2细胞摄取转运,为中等吸收物质,三者的摄取转运与浓度时间有关。4.β-胡萝卜素、玉米黄素二棕榈酸酯在较低浓度时主要以被动扩散的方式进入Caco-2细胞,在较高浓度时主要为载体介导的主动转运;玉米黄素在较低浓度时转运方式主要以主动转运的方式进入细胞,在较高浓度时可能同时存在被动扩散和主动转运。
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