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目的:整理睡眠剥夺与酸枣仁汤的相关文献,结合本课题组前期研究基础,通过建立老年大鼠慢性睡眠剥夺模型,探讨酸枣仁汤对老年失眠大鼠下丘脑视交叉上核系统和下丘脑腹外侧视前区系统及两者投射关系的作用及作用机制。方法:理论探讨:查阅睡眠剥夺与酸枣仁汤的相关文献,对经典的理论内容以及前沿的科学研究进行总结,明确睡眠觉醒调节机制以及酸枣仁汤的药效物质基础,探讨酸枣仁汤对睡眠剥夺实验动物的睡眠调节机制。实验探讨:选取SPF级SD老年大鼠,用自制睡眠剥夺箱剥夺快动眼睡眠21d,连续给药14d,其检测指标如下:1.酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺大鼠心肌细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达的影响Tunel染色法观察慢性睡眠剥夺后大鼠心肌细胞凋亡情况,免疫组织化学染色法观察慢性睡眠剥夺后大鼠心肌细胞bcl-2、bax表达的变化。2.酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺大鼠SCN系统的影响透射电镜观察大脑下丘脑视交叉上核部位形态学改变。采用免疫组织化学染色法观察c-fos蛋白表达的变化。免疫组织化学染色法以及Realtime-PCR法观察SCN中vSPZ和DMH区内第二信使NO合成酶(nNOS)以及VIP、AVP神经元表达的变化。3.酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺大鼠VLPO系统的影响免疫组化染色法和免疫荧光染色法观察甘丙肽表达的变化。尼氏染色法检测VLPO神经元表达的变化。免疫组化染色法和免疫荧光染色法观察GABA表达的变化,Realtime-PCR法检测下丘脑γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)α1和γ2亚单位的表达。采用荧光分光光度法检测5-HT含量,Realtime-PCR法检测下丘脑5-ht1ar、5-ht2armrna表达的变化。结果:1.酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺大鼠心肌细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达的影响tunel染色法观察心肌凋亡细胞凋亡情况实验结果与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组凋亡细胞数明显增加(p<0.05);与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组凋亡细胞数有不同程度的减少(p<0.05)。免疫组织化学染色法观察bcl-2、bax表达的结果与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组bcl-2、bax活性均呈现上升趋势(p<0.05);与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组相bcl-2、bax明显降低(p<0.05)。2.酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺大鼠scn系统的影响scn形态超微病理学观察结果与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组scn神经元中脂褐素(lipo)增多增大,扩张肿胀的golgi囊泡明显增多。与慢性睡眠剥夺组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组则lipo相对减少并且变小。其中酸枣仁汤组变化最为显著。与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组nnos、c-fosmrna表达上调;与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组c-fos、nnosmrna表达下调。与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组vip、avpmrna表达下调,;与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组vip、avpmrna表达上调。免疫组织化学染色结果与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组avp、vip表达减少,nnos、c-fos表达增加(p<0.05);与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组avp、vip表达增加,nnos、c-fos表达减少(p<0.05)。3.酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺大鼠vlpo系统的影响与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组下丘脑5-HT1AmRNA表达下调,5-HT2AmRNA表达上调;与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组下丘脑5-HT1AmRNA表达上调,5-HT2AmRNA表达下调。与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组下丘脑GABAARα1、GABAARγ2 mRNA表达水平上调;与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组GABAARα1、GABAARγ2 mRNA表达水平下调。与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组GABA、甘丙肽表达减少(P<0.05);与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组大鼠下丘脑GABA、甘丙肽表达增加(P<0.05)。荧光分光光度法检测大鼠下丘脑部位5-HT含量结果分析与环境对照组相比较,慢性睡眠剥夺模型组5-HT相对表达量降低(P<0.05)。与慢性睡眠剥夺模型组相比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组5-HT含量有不同程度的升高(P<0.05)。尼氏染色法检测VLPO神经元表达结果环境对照组大鼠VLPO神经元细胞形态正常,排列紧密,细胞结构完整,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁清晰,胞质内可见丰富的尼氏小体。慢性睡眠剥夺后大鼠染色情况发生明显变化,细胞排列疏松,部分神经元胞体皱缩,胞质内尼氏小体减少。免疫荧光染色法检测GABA、甘丙肽表达的结果与环境对照组相比,慢性睡眠剥夺模型组GABA、甘丙肽神经元表达量减少(P<0.05);与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组GABA、甘丙肽神经元表达量增加(P<0.05)。结论:酸枣仁汤可以通过调控下丘脑视交叉上核及下丘脑腹外侧视前区系统来调节睡眠觉醒机制,有效改善老年慢性失眠。