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运用实时荧光定量PCR研究基因表达时,内参基因的筛选和验证是非常必要的。忍冬(LonicerajaponicaThunb.)作为常用中药材,应用历史悠久,除药用外还可食用,而且是良好的生态植物。目前关于忍冬基因表达的研究较少,还没有报道筛选适合忍冬实时荧光定量PCR研究的内参基因。本研究从低温胁迫的忍冬叶片转录组数据中选择 10 个传统基因(Lonja.ACT11,Lonja.ACT2/7,Lonja.G6PD,Lonja.GAPDH,Lonja.MTP,Lonja.TUA,Lonja.TUB,Lonja.UBQ10,Lonja.EF1A,Lonja.UBC)和 11个新型基因(Lonja.23040,Lonja.23932,Lonja.27738,Lonja.32161,Lonja.36969,Lonja.44744,Lonja.46545,Lonja.49672,Lonja.48053,Lonja.53402,Lonja.66846),研究其在忍冬叶片低温胁迫、高温胁迫以及忍冬根、茎、叶片、花中的表达稳定性。选用geNorm和NormFinder软件综合进行评测,评测结果如下:(1)温度胁迫的叶片推荐使用Lonja.48053,Lonja.GAPDH组合来标准化转录本。低温胁迫下推荐Lonja.ACT2/7,Lonja.49672联合使用;高温胁迫下Lonja.23040,Lonja.48053联合使用效果最好。(2)综合研究忍冬不同器官时以Lonja.36369,Lonja.23932组合进行标准化。只研究营养器官时同样可以选用Lonja.23932,Lonja.36369组合。但是单独分析根时应选用 Lonja.ACT2/7,Lonja.3636 组合;茎选用 Lonja.27738,Lonja.36369 组合;叶片选用 Lonja.23932,Lonja.23040 组合;花选用 Lonja.23932,Lonja.27738 组合。(3)综合研究忍冬所有材料时建议选用Lonja.36369和Lonja.27738组合作为内参基因,提高实时荧光定量PCR结果的准确性。另外,以Lonja.49672,Lonja.ACT2/7组合作为内参基因,以Lonja.39828和Lonja.56446作为目的基因,研究其基因表达量。实时荧光定量PCR结果和转录组数据分析结果一致,说明本研究筛选的内参基因准确性高。本研究首次结合转录组数据筛选出适合研究忍冬实时荧光定量PCR的内参基因,为忍冬的基因表达等分子研究奠定了基础。