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盐胁迫是植物面临的主要非生物胁迫,它严重影响植物的生长,并造成减产。而盐角草(Salicornia europaea L.)可以在1020 mM NaCl下生存,是一种喜盐植物,是抗盐基因的良好供体。本工作以盐角草为材料,利用RACE的方法克隆了V-ATPase A亚基基因SeVHA-A。利用qRT-PCR和GFP融合蛋白亚细胞定位的方法分析基因的表达模式,并通过酵母突变体互补、拟南芥突变体互补和拟南芥过表达体系进行功能分析,试图据此深入了解V-ATPase在植物抗盐反应中所起的作用。
研究结果表明,SeVHA-A基因全长为2470 bp,编码区长1872 bp,编码623个氨基酸,预测分子量为68.5 kDa,等电点为4.81。A亚基可能定位于内膜系统中。在200和800 mM NaCl条件下,SeVHA-A基因在地上部分和地下部分的表达存在着差异,地上部分显著上调,而地下部分表达量明显下降。与AtVHA-A及ScVMA1一样,SeVHA-A能使酵母突变体恢复野生型对高pH的抗性。同样,SeVHA-A也能使拟南芥突变体部分恢复其野生型的表型。在拟南芥中过表达SeVHA-A基因,能显著增强VHA-B和VHA-C基因的表达,并增强拟南芥种子萌发期及萌发后期(或幼苗期)对NaCl的耐受性。以上结果说明SeVHA-A具有器官表达差异,该基因及其编码蛋白参与了植物的抗逆反应,有可能在抗逆性状改良中发挥作用。