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缩胆囊素(CCK)存在于脑和胃肠道中,是一种调节动物采食量的有效因子.外源性和机体自身生成的内源性的CCK,都能使机体产生饱感,进而抑制采食.采用主动免疫CCK的方法,可以中和内源性的CCK,从而提高动物采食量和增重.该研究采用大肠杆菌表达系统和T4噬菌体表面蛋白展示系统,首次在体外表达了鸡CCK33基因及其多串联体.研究表明,用大肠杆菌表达的纯化CCK多串联体和含有CCK多串联体的重组T4噬菌体都具有良好的免疫原性.1、根据已发表的鸡CCK-33基因的碱基序列及大肠杆菌高频密码子,设计了大肠杆菌表达系统偏爱的CCK基因序列,CCK-33基因长度约为100 bp,加上酶切位点后长度约为120bp.测序结果证明所构建的多串联体的DNA序列与理论设计的完全吻合,读码框也正确.2、对CCK-33基因四串联体和CCK-33基因六串联体在大肠杆菌中进行融合表达,在IPTG的诱导下,两种融合蛋白都得到表达,其最高表达量分别占细菌总蛋白的25.8%和34.6%.Western Blotting结果表明,表达产物都能与相应的抗体进行反应.将CCK-33基因四串联体所表达的融合蛋白用纯化树脂50%Ni-NTA在变性条件下进行纯化,得到纯化的CCK-33肽四串联体蛋白4CCK.3、将CCK-33基因、CCK-33基因四串联体、八串联体与pSOC质粒重组,获得重组质粒pSOC-1CCK、pSOC-4CCK、pSOC-8CCK.4、将CCK-33基因、CCK-33基因四串联体、八串联体与pR质粒重组,获得重组质粒pR-1CCK、pR-4CCK、pR-8CCK,然后通过重组质粒将融合有外源基因的SOC融合基因整合到缺失SOC基因的T4噬菌体基因组,获得重组T4噬菌体φT4-1CCK、φT4-4CCK和T4-8CCK.5、采用纯化4CCK蛋白、重组噬菌体φT4-1CCK、φT4-4CCK和φT4-8CCK为抗原制备油佐剂疫苗,然后主动免疫肉鸡.