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海洋微生物能产生化学结构和生物活性多样性的天然产物,在海洋生态环境中扮演着重要的角色,因此一直是海洋药物开发研究热点。珊瑚共附生真菌多样化程度很高,能产生很多结构独特,活性良好的次级代谢产物。因此,珊瑚微生物产生的次级代谢产物化学结构和药理活性得到了广泛研究。本课题组前期从徐闻珊瑚自然保护区普哥滨珊瑚中,筛选出一株具有抗菌,抗氧化和乙酰胆碱酯酶抑制活性菌株土曲霉XWC21-10。对该菌株进行活化,大量发酵,对发酵液和菌丝体的浸膏进行活性检测和化学组分分析比较。分离纯化,得到单体化合物,对所得单体化合物进行纯度分析和结构鉴定,同时对其进行活性筛选和评价。(1)发酵液和菌丝体浸膏活性评价。分别对其进行DPPH自由基清除活性,乙酰胆碱酯酶抑制活性,卤虫致死和抗炎活性研究,结果表明,该菌株发酵液和菌丝体同时含有具有DPPH自由基清除活性和乙酰胆碱酯酶抑制的活性成分,其卤虫致死活性不明显,发酵液和菌丝体对RAW264.7(鼠巨噬细胞)具有细胞毒性,抗炎活性不明显。分别运用HPLC和TLC的方法判断发酵液和菌丝体浸膏含有相对丰富的化学成分,并具有相似的组分,合并进行分离纯化。(2)次级代谢产物分离和结构鉴定。合并发酵液和菌丝体浸膏,运用高效液相色谱(HPLC)和凝胶柱色谱结合的方法,对其分离纯化。分离得到单体化合物,对所得单体化合物进行纯度分析,结合核磁共振氢谱、碳谱(1H NMR、13C NMR)以及质谱(MS)等波谱分析技术,最终确定9个化合物的结构。它们分别是A-1(大黄素甲醚),A-3((Z,Z)-9,12-十八烷二烯酸),A-4(Z-9-十八烷烯酸),A-5(过氧麦角甾醇),A-7(大黄素),ZB-2-1(曲地酸),ZB-4-3(butyrolactonesⅠ),ZB-4-4(butyrolactoneⅦ),ZB-5-2(butyrolactones Ⅱ)。(3)次级代谢产物活性评价。对部分化合物进行抗菌,DPPH自由基清除,乙酰胆碱酯酶抑制和抗炎活性筛选。三种丁内酯类化合物ZB-4-3,ZB-4-4,ZB-5-2,有不同程度的抑菌活性。其中ZB-4-3(butyrolactonesⅠ)对副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌有抑菌效果,MIC分别为3.125μM,6.25μM。ZB-4-4(butyrolactoneⅦ),ZB-5-2(butyrolactones Ⅱ)对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有抑菌活性,MIC分别都是1.56μM。曲地酸(ZB-2-1)和三种丁内酯类化合物具有DPPH自由基清除的活性,EC50分别36.68±0.17μM,24.56±1.21μM,31.30±0.45μM,56.29±0.35μM。ZB-2-1同时具有乙酰胆碱酯酶抑制活性。两个丁内酯化合物ZB-4-4,ZB-5-2不具有RAW264.7细胞毒性,化合物浓度与LPS诱导细胞释放NO量成负相关,说明其具有较好的抗炎作用。本研究从普哥滨珊瑚的一株共附生真菌发酵产物中分离得到单体化合物,并对其生物活性进行探究,最终确定9个化合物结构。其中,丁内酯Ⅶ化合物(ZB-4-4),及其活性报道较少,该研究首次检测其具有抗菌,DPPH自由基清除双重活性,丰富了该类化合物的研究,为以后化合物丁内酯Ⅶ的研究奠定基础。本研究为进一步利用珊瑚共附生真菌资源提供基础数据,同时丰富了海洋来源的土曲霉代谢产物的认识。