γ-氨基丁酸对低温胁迫下苋菜生长及光合特性的影响

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苋菜(Amaranthus tricolor L.)是苋科苋属一年生C4草本植物,生长迅速,产量高,是夏季常见的绿叶蔬菜,富含甜菜色素,可作为甜菜红素提取的重要来源。温度是影响植物生长及次生代谢的重要环境因子之一,低温能够降低植物的叶绿素含量及叶绿素荧光参数,抑制了苋菜的生长及甜菜色素的合成。而外源γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)可以减少植物体内有害物质的积累,有助于维持细胞形态,提高逆境迫下细胞的功能,减少胁迫对光合系统的损害,改善光合作用和叶绿素荧光参数。本研究以‘苏苋1号’为试验材料,探究低温胁迫及外源GABA对苋菜生长及营养品质的影响,利用qPCR分析低温胁迫及外源GABA对苋菜光合作用相关基因及谷氨酸脱羧酶(GAD)基因表达的影响,最后利用拟南芥遗传转化进一步验证苋菜AtrNADP-ME的功能。主要研究结果如下:1.低温胁迫对苋菜生长及营养品质的影响对3叶期苋菜进行不同低温处理,分析不同温度下苋菜的株高、叶绿素含量、叶绿素荧光参数、甜菜色素含量及内源GABA含量5个指标。结果表明,随着温度的降低,苋菜的植株高度呈下降趋势,在15℃时苋菜生长缓慢,10℃时停止生长,说明低温明显抑制苋菜的生长,而且低温胁迫越久抑制程度越明显。叶绿素和甜菜色素的含量也是随着温度的降低呈显著下降趋势,且随着处理时间的延长含量也越低;叶绿素荧光参数在10℃时受到显著抑制;低温能够促进内源GABA含量的积累。因此,低温胁迫抑制苋菜的生长,降低苋菜叶绿素和甜菜色素含量,降低叶绿素荧光参数,促进内源GABA含量的积累。2.外源GABA对低温胁迫下苋菜生长及营养品质的影响3叶期苋菜喷施不同浓度的GABA后,置于15℃条件下培养,对苋菜的株高、叶绿素含量、叶绿素荧光参数、甜菜色素含量及内源GABA含量这5个指标进行分析。随着外源GABA浓度增加,苋菜的植株高度呈现先上升后下降的趋势。与喷施清水作为对照相比较,外源GABA浓度为100 mg/L处理时苋菜植株最高,而浓度为200mg/L时抑制植株生长;叶绿素含量随着外源GABA浓度的增加而升高,但叶绿素荧光参数没有显著差异;在50 mg/L GABA处理下的甜菜色素含量最高;在外源GABA为100 mg/L时,内源GABA含量最高。因此,低浓度外源GABA能够促进苋菜生长,缓解低温下苋菜叶绿素降解,促进苋菜甜菜色素合成,外源GABA对内源GABA的合成也有一定的促进作用。3.低温胁迫及外源GABA对苋菜光合作用基因及GAD基因表达的影响qPCR分析显示:AtrPEPC基因的表达量随着温度的降低先升高后降低,而AtrPPCK、AtrMDH、AtrNADP-MDH、AtrNAD-ME、AtrNADP-ME、AtrPPDK整体上通过下调表达响应温度的降低,光合作用基因的表达量与温度呈显著正相关。AtrGAD基因的表达量随着温度的下降呈显著的上升趋势,低温诱导AtrGAD基因的表达。处理3 d后,外源GABA抑制苋菜AtrGAD基因的表达;当处理6 d和12 d后,外源GABA反而促进苋菜AtrGAD基因的表达。短时间内外源GABA对苋菜AtrNADP-ME基因的表达作用不明显,随着时间的延长,外源GABA促进苋菜AtrNADP-ME基因的表达。因此,低温胁迫抑制光合作用基因的表达,促进AtrGAD基因上调表达;外源GABA能够促进低温胁迫下苋菜AtrGAD和AtrNADP-ME基因的表达。4.苋菜AtrNADP-ME的功能分析采用农杆菌转化拟南芥的方法验证苋菜AtrNADP-ME的功能。转化植株和野生型拟南芥PCR扩增显示:野生型未扩增出目的条带,而转化植株同时扩增出AtrNADP-ME、GUS及Hyg基因;qPCR结果显示:转化植株中AtrNADP-ME基因的表达量是野生型的2000多倍;对于其功能还有待进一步验证。
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