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目的:筛选与乳腺癌相关的microRNAs (miRNAs)异常表达谱;分析差异性niRNAs与乳腺癌组织中各临床病理特征如雌邀素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(Her-2)、Ki67增殖指数、突变型P53蛋白及增殖细胞核抗原((PCNA)的关系;评估差异性miRNAs作为乳腺癌诊断及预后的潜在价值;明确差异性表达的miR-141及miR-15a在乳腺癌发展过程中所起的作用。方法:采用miRNAs表达谱芯片技术对9份福尔马林固定、石蜡包埋(formalin fixed paraffin embedded, FFPE)乳腺组织标本(包括分子分型为Luminal-like的癌组织3例、与Luminal-like癌组织对应的癌旁组织3例以及分子分型为Basal-like的癌组织3例)进行miRNAs的表达谱差异性分析。利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)技术在106例癌组织、22例癌旁组织与66例乳腺良性病变组织中验证芯片差异性miRNAs表达谱的结果;采用三种软件(Targetscan、PITA及miRNAorg)对候选miRNAs进行靶基因预测;采用Lipofectamine2000转染候选miRNA mimics及mimics阴性对照于乳腺癌MDA-MB-231细胞中,采用流式细胞技术分析细胞凋亡和细胞周期;采用CCK-8实验检测细胞活力,Transwell实验观察细胞的侵袭力,划痕实验观察细胞的迁移能力;qPCR技术检测候选miRNAs的靶基因mRNA表达情况;western blotting检测靶基因的蛋白表达。利用双荧光素酶报告实验验证miRNAs的靶基因。结果:(1)乳腺癌组织(Luminal-like)与其对应的癌旁组织比较,严格以p<0.05,基因上调或下调差异倍数>2.0倍作为芯片筛选标准,癌组织中有37个成熟型miRNAs上调表达,8个成熟型miRNAs下调表达;Basal-like型的癌组织与Luminal-like型的癌组织比较,严格以p<0.05,基因上调或下调差异倍数>1.5倍作为筛选标准,有3个成熟型miRNAs上调,4个成熟型miRNAs下调。(2) qRT-PCR验证芯片结果:与良性病变组织相比,miR-15a、miR-141及miR-205在乳腺癌组织中呈现低表达(p<0.05),其中miR-141在Basal-like型癌组织中表达要比Luminal-like型癌组织中表达更低(p<0.05),miR-130b在乳腺癌组织中呈现高表达状态(p<0.05)。(3) miR-15a与miR-141的表达水平与乳腺癌组织中Ki67、PCNA的表达呈负相关(p<0.05)。此外,miR-15a还与乳腺癌组织突变型P53蛋白的表达呈负相关(p<0.05)。miR-205与患者的年龄相关,在大于50岁的患者中miR-205的表达水平要比小于50岁的患者中更低(p<0.05)。(4)miR-141可促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,使细胞休眠在G1期,抑制细胞G1/S期转化,抑制细胞增殖,降低细胞的侵袭和迁移能力;miR-15a可促进细胞凋亡、抑制细胞增殖。(5)与转染mimics阴性对照组相比,转染miR-141mimics的MDA-MB-231细胞,ANP32E的mRNA表达水平和蛋白表达水平均显著下降(p<0.05)。同样,与转染mimics阴性对照组相比,转染miR-15a mimics的MDA-MB-231细胞,SNCG的mRNA表达水平和蛋白表达水平均显著下降(p<0.05)。(6)双荧光素酶报告实验显示当psiCHECK2-ANP32E3’UTR与miR-141mimics共转染细胞后,荧光素酶活性下降,而与mimics阴性对照共转染,荧光素酶活性则没有下降。同样,当psiCHECK2-SNCG3’UTR与IniR-15a mimics共转染细胞后,荧光素酶活性下降,而与mimics阴性对照共转染,荧光素酶活性则没有下降。结论:在乳腺癌发生发展的过程中,miR-130b演致癌基因的作用。miR-141和miR-15a行使抑癌性miRNAs的功能,可能分别通过作用于靶基因ANP32E与SNCG的3’-UTR发挥抑瘤效应。miR-141表达水平的高低与乳腺癌细胞增殖及侵袭能力相关,乳腺癌患者组织中miR-141的低表达提示患者预后不良。