过表达BMP4、MSX1、PAX9对牙髓干细胞牙向分化潜能的影响

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人类一生仅有一次更换牙齿的机会,牙齿的损伤或缺失无疑会对人们的日常生活带来很大的影响。牙齿再生由于其再造牙齿的重要意义和实现的可能性,已经成为组织工程学的研究热点。牙髓干细胞(dental pulp stem cell, DPSC)是近年来应用于组织工程学研究的一类种子细胞。天然DPSC可以修复牙齿组织的损伤,但是缺乏诱导上皮分化和再生出牙齿的能力。因此,本篇论文的重点在于借助慢病毒介导的基因过表达方法,分析BMP4、MSX1、PAX9的过表达对DPSC牙向分化潜能的影响。在本论文的研究工作中,我们分离了成人第三磨牙的牙髓干细胞,并传代培养。然后先后利用携带有BMP4、MSX1、PAX9目的基因的慢病毒载体,制备出大量具有感染能力的慢病毒并浓缩至较高的滴度,分别对牙髓干细胞进行感染,从而实现目的基因的过表达。我们将分别过表达BMP4、MSX1、PAX9的牙髓干细胞与HA/TCP支架结合,移植到裸鼠的背部皮下,8周后取出移植块,观察其结构。结果发现:过表达BMP4的DPSC和过表达MSXl的DPSC移植块形成肿瘤样结构,说明BMP4.MSX1的过表达有可能改变了DPSC的增殖特性,使其转化成为肿瘤细胞;过表达PAX9的DPSC、正常DPSC和被空载病毒感染的DPSC的移植块形成牙本质基质样结构并且在胞外基质中表达牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP),而且PAX9过表达的DPSC移植块表达更多DSP,说明PAX9的过表达有可能提高了DPSC的牙向分化潜能和诱导成牙的能力。
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