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血红素加氧酶(heme oxygenase, HO)是一种最广泛存在的抗氧化防御酶,是热休克蛋白家族中的一员,HO为血红素代谢的限速酶,可代谢血红素生成CO、胆绿素和游离铁。胆绿素随后被胆绿素还原酶(biliverdin reductase,BVR)还原成胆红素,而游离铁与转铁蛋白结合。蛋壳颜色是蛋鸭的一个重要经济性状,它是由蛋壳中的色素的成分和含量决定的,而胆绿素还原酶和血红素加氧酶是色素代谢过程中的关键酶。本文通过鸭子宫部提取的总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出部分鸭HO和BVR基因cDNA编码序列,通过克隆测序后进行序列分析,并建立相对定量RT-PCR检测方法,对两种基因mRNA表达量进行研究。根据GenBank登录的鸡、小鼠、牛、蟾蜍和人HO和BVR基因的编码区序列比对结果,利用其保守区域应用Primer5.0设计引物,以缙云麻鸭子宫部的总RNA为模板进行PCR反应。将PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收,与克隆载体pMD19-T连接后,并转化E.coli JM109,加入SOC培养基培养,将培养液涂于含有X-Gal, IPTG, AMP的琼脂平板培养基上,37℃培养过夜。用蓝白斑筛选阳性克隆,挑取白斑于含有AMP的LB液体培养基中培养。用质粒提取试剂盒提取质粒,经双酶切和菌液PCR两种方法验证阳性克隆,扩增片段分别为364bp和634bp片段,将其与GenBank中已发表的鸡、小鼠、牛、蟾蜍和人的HO和BVR基因cDNA序列及推测的氨基酸序列对比,结果发现鸭HO基因的cDNA与鸡、小鼠、牛、蟾蜍和人HO基因的cDNA序列分别有93.1%,70.4%,70.1%,63.6%,71.5%的同源性,氨基酸分别有98.4,91.1%,59.3%,86.2%,91.1%的同源性；鸭BVR基因的cDNA与鸡、小鼠、牛、蟾蜍和人BVR基因的cDNA序列分别有92.6%,64.9%,62.8%,69.0%,63.6%的同源性,氨基酸分别有96.2%、59.7%、60.7%、68.4%、59.7%的同源性。因此可以推断该基因片段为鸭HO和BVR cDNA的部分序列。以看家基因GAPDH为内参,建立Real Time-PCR检测HO和BVR表达的相对定量方法。根据实时定量PCR扩增曲线的Ct值,利用SAS软件分析,得到结论BVR基因mRNA表达量与白壳和青色蛋壳有很大的关联,HO基因mRNA表达量和青色蛋壳相关性很大。