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目的:构建CTGF真核表达载体pcDNA3.1-CTGF及其阴性对照pcDNA3.1-EGFP,转染相对低表达CTGF的胃癌细胞,观察上调CTGF表达水平对胃癌细胞增殖及侵袭迁移的影响,并利用表达谱芯片分析差共同的差异表达基因。 方法:提取胃癌细胞(AGS、SGC-7901、MKN-45和BGC-823)总RNA,利用PCR技术检测胃癌细胞系CTGFmRNA表达水平差异。构建pcDNA3.1-CTGF表达载体,运用细胞转染技术对相对低表达CTGF的胃癌细胞转染经测序鉴定后的pcDNA3.1-CTGF和pcDNA3.1-EGFPD表达载体,转染pcDNA3.1-CTGF质粒的作为实验组,转染pcDNA3.1-EGFP的细胞作为阴性对照,转染后细胞经过G418筛选,Q-PCR, western blot鉴定,选择CTGF表达最高的实验组和表达最低的阴性对照组,通过MTT、trans-well实验,分析转染pcDNA3.1-CTGF后胃癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化。利用安捷伦表达谱芯片分析转染pcDNA3.1-CTGF前后基因表达变化并进行差异聚类分析,并对差异明显基因进行PCR检测验证。 结果:1.胃癌细胞系CTGF mRNA相对表达水平BGC-823>SGC-7901>AGS>MKN-45 2.成功构建了pcDNA3.1-CTGF真核表达载体及阴性表达载体pcDNA3.1-EGFP。 3.通过重组质粒DNA转染、RT-qPCR检测,成功获得CTGF表达水平最高的实验组(MKN45-CTGF、AGS-CTGF、SGC7901-CTGF)和表达最低的Negative control组(MKN45-EGFP、AGS-EGFP、 SGC7901-EGFP)细胞。 4.MTT实验显示,72h后,实验组相对增殖率分别是对应Negative control的1.37、1.47、1.64倍。迁移实验表明,24小时后实验组穿过膜的细胞数达到140.7±17.2、132.7±12.0、146.0±13.9个;Negative control组穿过膜的细胞数为74.3±9.6、83.0±8.0、93.3±11.5个;实验组细胞穿膜个数分别是Negative control穿膜个数的1.89、1.60、1.57倍。侵袭实验显示,48小时后实验组穿过膜的细胞数达到87.3±t2.7、70.7±19.1、69.3±11.7个;Negative control组穿过膜的细胞数为54.7±8.1、35.0±11.5、37.3±4.0个;实验组细胞穿膜个数分别是Negative control穿膜个数的1.60/2.02/1.86倍。 5.表达谱芯片结果显示实验组各细胞VASP基因表达水平均明显增高,标准化后的VASP基因表达水平分别是Negative control的2.242、3.907、3.151倍。PCR检测显示实验组VASPmRNA表达水平分别是Negative control的2.09、3.23、3.84;是Normal control的18.2、9.33、14.7倍。 结论:1.CTGF对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移能力具有促进作用;2.CTGF对胃癌细胞促进作用与上调VASP表达水平有关。