脓毒症(Sepsis)及其引发的脓毒性休克和多器官功能障碍综合征(MultipleOrgan Dysfunction Syndrome，MODS)是危重患者的主要死亡原因之一，在我国其死亡人数高达每年100万人以上，已成为进一步提高危重症救治成功率的最大障碍。由于目前脓毒症诊断主要依赖于临床症状，这种主观指标在一定程度上造成了临床紧急救治的困惑。加强脓毒症的基础研究，尤其是对脓毒症发展过程中关键分子的研究，具有十分重要的理论价值和临床意义。　　 炎症发生的过程中，众多血浆蛋白质发生了显著的丰度和修饰应急变化，其中血浆糖蛋白的变化更是如此。在过去的很长一段时间内，由于方法学的限制，有关血浆糖蛋白与炎症之间的关系一直缺乏整体和系统的研究。蛋白质组学技术的出现在根本上改变了这种局面。双向电泳和质谱技术联用对蛋白质不同糖基化修饰形式的变化是一种非常直观和有效的检测方法。该方法十分适合于在整体水平测定与脓毒症密不可分的炎症系统中不同的完整糖蛋白所发生的糖基化修饰的改变。　　 我们采用脓毒症小鼠盲肠结扎穿孔(Cecal Ligation and Puncture，CLP)模型，选择脓毒症发生过程中不同时间点(CLP后4和24小时)的血浆样品，比较了其间的血浆蛋白质组以及糖蛋白质组的变化，试图寻找与脓毒症相关的糖基化血浆蛋白以及相应的糖基化修饰改变。实验结果表明，手术后4小时的对照组和CLP组小鼠血浆蛋白的双向电泳图谱之间没有发生显著的变化，而手术后24小时的CLP组小鼠血浆蛋白的双向电泳图谱显著地不同于对照组。值得注意的是，这些变化的趋势是一致的，即CLP24小时后血浆中出现了许多分子量逐降、等电点渐升的差异电泳斑点位于成串排列蛋白点的偏碱端。通过质谱分析，我们发现，大部分与CLP相关的差异电泳斑点都是血浆糖蛋白。进一步采用PNGaseF处理样本，我们还证明了这些变化主要来自于差异蛋白质中N-连接糖基化修饰程度的降低。　　 既然血浆蛋白中富含与疾病相关的生物标志物，那么发展高灵敏度检测糖蛋白的技术自然是临床医学应用所必需的。虽然免疫化学法是目前公认的检测蛋白质较为灵敏和稳定的技术，但是糖蛋白抗体制备的困难性限制了这项技术的发展和应用。传统单克隆抗体制备工艺在糖蛋白抗体生产中的主要困难在于，由于纯化和丰度限制，难以获得足够的天然糖蛋白作为抗原。而原核表达的蛋白质缺乏合适的糖基化修饰，在作为抗原生产抗体时，得到的抗体往往不能很好的识别糖蛋白。据此，我们在本研究中试图开发一种新型的糖蛋白单克隆抗体的制备方法，并应用于生产与疾病相关的生物标记物的单克隆抗体。　　 我们以人α1酸性糖蛋白(α1-acid glycoprotein，AGP)为例，采用体内合成抗原的方法制备糖蛋白单克隆抗体，其主要步骤为：1)将外源糖蛋白基因通过逆转录病毒导入到小鼠黑色素瘤细胞B16中，经过筛选获得稳定表达株。该表达株可以持续的将外源糖蛋白分泌到细胞外；2)将稳定株细胞和佐剂混合后经皮下注射到C57BL/6J小鼠体内，随着细胞的不断增值和生长，外源糖蛋白被持续分泌到小鼠体内作为抗原刺激机体产生抗体；3)将血清呈阳性反应的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合后，通过多次筛选，可以得到可特异识别外源糖蛋白的单克隆抗体。我们采用该方法成功地生产了针对AGP的单克隆抗体，这些单克隆抗体可以特异性的识别糖基化修饰的AGP，而对非糖基化的AGP几乎不具有识别能力。通过制备AGP单克隆抗体的实例，我们也建立了一套生产糖蛋白单克隆抗体的工艺程序，它可以广泛应用于其它糖蛋白单克隆抗体的制备。