背景内耳的毛细胞比较容易受到有耳毒性药物的损伤，例如某些化学药品、化疗药品以及氨基糖甙类抗生素等。以往大量研究表明耳毒性药物是通过引起毛细胞凋亡的方式，导致毛细胞死亡，而Caspase通路被认为在耳毒性药物引起毛细胞死亡过程中起重要作[1-4]。然而近期有研究者在对庆大霉素耳毒性的研究中，通过使用Caspase抑制剂z-vad-fmk的实验中发现，使用了抑制剂后耳毒性药物引起毛细胞死亡的情况未得到减轻，实验动物的听力未得到明显保护，从而提出庆大霉素致聋过程中，除了经典的caspase通路引起细胞凋亡外，还存在一条非caspase依赖凋亡通路[4]，即AIF凋亡通路，并且发挥了一定的作用。正常生理状态下，AIF[5-8]是一种位于线粒体内膜上的黄素蛋白，发挥着氧化还原酶的作用，当细胞接收到凋亡刺激信号后，AIF从线粒体内释放入细胞质内，并进入细胞核，发生核转位，引起细胞核内染色体凝集以及大分子DNA片段断裂，导致细胞凋亡。我科在1999年-2003年与美国密歇根大学听力研究中心联合开展了临床阿司匹林预防庆大霉素耳毒性的随机对照试验，研究表明，同时伍用阿司匹林的患者可以有效减轻庆大霉素的耳毒性损伤[9,10]。但阿司匹林在抗庆大霉素耳毒性的过程中是如何发挥作用的尚不清楚，AIF是否参与了毛细胞凋亡尚不清楚以及AIF在阿司匹林抗庆大霉素耳毒性的过程中的作用机制尚有待进一步研究。本实验通过制作庆大霉素内耳损伤大鼠模型，利用ABR检测、耳蜗改良基底膜铺片、免疫荧光染色、RT-PCR、以及Western-blot等技术，观察两组大鼠听力、毛细胞形态变化以及毛细胞凋亡过程中AIF的表达变化。以研究AIF在阿司匹林抗庆大霉素耳毒性中的表达及作用研究。目的通过使用庆大霉素损伤大鼠内耳模型，证实阿司匹林对庆大霉素的预防作用，同时观察在阿司匹林抗庆大霉素耳毒性过程中细胞凋亡的情况，以及AIF的毛细胞凋亡过程中的表达情况，以及阿司匹林抗庆大霉素耳毒性过程中AIF发挥的作用。方法通过使用庆大霉素制作大鼠内耳损伤模型，实验分为单独使用庆大霉素的损伤组（GM组）和阿司匹林+庆大霉素的保护组（ASA+GM组）。通过使用以下实验方法：1、利用ABR检测2组大鼠听力情况；2、利用耳蜗铺片+免疫荧光技术，进行2组大鼠耳蜗毛细胞形态学观察；3、采用全耳蜗毛细胞计数方法[11]，观察2组耳蜗毛细胞的缺失情况；4、利用免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜观察2组细胞核的形态、AIF的表达以及核转位情况；5、使用Real-time PCR和Western-blot方法检测2组基底膜AIF的表达情况。通过以上实验方法观察阿司匹林抗庆大霉素耳毒性的作用，AIF的表达情况以及AIF所发挥的作用。结果1、ASA+GM组大鼠在用药第7d、14d、21d检测ABR，不同频率的阈值均低于GM组（P<0.05）；2、ASA+GM组大鼠毛细胞缺失率明显小于GM组（P<0.05）；3、ASA+GM组发生凋亡的细胞较GM组明显减少，同时AIF核转位情况较GM组少。4、Real-time PCR和Western-blot结果显示ASA+GM组AIF的表达量少于GM组（P<0.05）。综上，同时服用阿司匹林有较好的预防庆大霉素耳毒性的作用，AIF在阿司匹林抗庆大霉素耳毒性过程中参与了毛细胞的凋亡，且在GM组观察到毛细胞发生凋亡时AIF发生明显的核转位现象，而在ASA+GM组AIF发生核转位情况较少，同时Western-blot结果也显示GM组AIF的蛋白量明显高于ASA+GM组（p<0.05），因此推测，阿司匹林抗庆大霉素耳毒性过程中有可能是通过抑制AIF发生核转位，从而减少毛细胞凋亡达到保护听力的作用。结论庆大霉素耳毒性可以造成耳蜗毛细胞的死亡，而这种死亡大部分是通过细胞凋亡的方式，且AIF在细胞发生凋亡过程发挥重要作用，阿司匹林可以明显的减轻庆大霉素的耳毒性，且可以减少毛细发生凋亡。综上推测，阿司匹林抗庆大霉素耳毒性过程中有可能是通过抑制AIF发生核转位，从而减少毛细胞凋亡，进而保护了实验动物的听力。这可能是阿司匹林在庆大霉素致聋过程中发挥保护作用的机制之一。