目的： 晚期冠心病治疗的难点在于缺血和心肌细胞不可逆损失所导致的心功能衰竭。根据现代分子生物学和组织工程学的研究进展，将能在哺乳动物细胞有效表达血管内皮生长因子（VEGF）的质粒转入成人成肌细胞中，在体外证实细胞活性及VEGF的有效表达，以期在后期的体内实验中同时达到分子心肌血运重建和细胞心肌成形的目的，为临床治疗晚期冠心病提供新的有效方法。 方法： 第一部分：将pcDNA3.1-VEGF₁₆₅质粒用电转的方法导入CHO细胞中，G418筛选细胞克隆。通过RT-PCR、ELISA、Westen-blot在转录水平和蛋白质水平上检测VEGF₁₆₅在转基因CHO细胞中的表达。通过内皮细胞增殖实验和血管通透性实验检测所表达的VEGF₁₆₅的生物学活性。 第二部分：体外分离、培养、纯化成人成肌细胞并通过光学显微镜、电子显微镜和免疫组织化学法对培养细胞进行鉴定。 第三部分：将经检测的pcDNA3.1-VEGF₁₆₅质粒用阳离子脂质体的方法导入所培养的成肌细胞中，通过RT-PCR、内皮细胞增殖实验证实VEGF₁₆₅在成肌细胞中的表达及其生物学活性。 结果： 第一部分：获得有G418抗性的CHO细胞克隆。RT-PCR扩增出一条大小约600bp的特异性泳带，测序结果与VEGF₁₆₅mRNA一致。ELISA显示细胞培养上清的VEGF浓度约为10～20ng/ml。WESTEN－BLOT检测到大小为23KD的特异性蛋白质条带。内皮细胞增殖实验显示细胞培养上清具有促内皮细胞增殖作用。血管通透性实验显示细胞培养上清明显增加毛细血管通透性。 第二部分：培养细胞为成纤维样细胞。免疫组织化学法显示细胞为Desmin阳性。电子显微镜示培养细胞为幼稚肌源例Z细胞。 第三部分：转基因成肌细胞经RTPCR扩增出一条大小约600hp的特异性泳带，测序结果与VEGF；的mRNA一致。血管通透性实验显示转基因细胞培养上清明显增加毛细血管通透性。 结论：l，PCDNA3．IVEGF；“质粒真核表达系统能在哺乳动物细胞中表达具有良好生物学活性的VEGF；。；蛋白。2，在一定的体外条件下，成人成肌细胞可以很好地分离培养增殖。3，阳离子脂质体法能介导PCDNA3．IVEGF；u质粒在成人成肌细胞中表达有生物学活性的VEGF165蛋白。4，体外培养的成人成肌细胞没有VEGF蛋白的基石 分泌。