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目的利用生物信息学软件筛查肺癌组织中与PUMA基因相关的miRNAs,并通过实时荧光PCR技术检测筛查出来的miRNAs在肺癌组织中的表达情况；探讨EB病毒感染与肺癌的关系,并进一步探讨EB病毒编码的miR-BART5在肺癌组织中的表达情况。方法1.利用生物信息学数据库,查找可能调节PUMA基因的miRNAs,并定制成采用实时荧光定量PCR技术检测的试剂盒。2.收集肺癌组织癌旁组织和肺良性病变组织,应用定制的试剂盒检测筛查出来的miRNAs在肺癌组织中的表达情况。分析各miRNA的表达情况与临床病理参数之间的相关性。3.选取表达有显著差异性的miRNA进行扩增,应用TA克隆重组技术进行测序分析,初步验证目标miRNA的序列。4.利用实时荧光定量PCR技术检测鲜肺癌组织和肺良性病变组织中EB病毒的感染情况,并检测EB病毒编码的miR-BART5在肺癌组织中的表达情况,对扩增产物进行TA克隆及测序分析,验证目标序列的符合性。主要结果1.利用生物学数据库进行分析发现可能调节PUMA的miRNAs有96个,将这些miRNAs定制成试剂盒,应用实时荧光定量PCR技术进行检测,结果发现有10种miRNAs在肺癌组织中表达上调,其中miRNA-221表达上调约16倍。2.有文献报告,在神经胶质细胞瘤中,miRNA221/222可以靶作用于puma调节细胞凋亡,我们选取了miR-221/222进一步检测在肺癌组织中和肺良性病变组织中表达差异性,结果显示在两种组织中表达有统计学差异(P<0.05)3.应用实时荧光定量PCR检测肺癌组织中EB病毒的感染情况,结果21例肺癌组织EB病毒感染率为42.85%(9/21),11例肺正常组织中未检测出EB病毒。4.实时荧光定量PCR检测EB病毒编码的miR-BART5在肺癌组织和肺良性病变组织中的表达情况,经秩和检验,miR-BART5的表达在肺癌与肺良性病变组织间差异具有统计学意义(P<0.05)。5.将miR-221和miR-BART5的扩增产物连接pMD19-T载体,进行测序分析,结果与基因库查公布的序列完全吻合。结论1.实时荧光定量PCR检测显示肺癌组织中与PUMA基因相关的几种miRNAs表达上调,提示这些miRNA可能参与PUMA基因的表达调控及肺癌的发生发展有关。2.关于PUMA基因是否是miR-221和miR-BART5的靶基因,以及他们对PUMA的调控和与肺癌的关系需要进一步深入研究验证。