磁性纳米颗粒在靶向给药及蛋白组学分离检测中的初步研究

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磁性纳米粒子因其固有的磁性和纳米尺寸效应在生物医药方面已经得到了广泛的研究,但因其较低的载药量限制了它们在这个领域的发展。生物纳米磁小体(BMP)作为一种提取于生物体内的磁性纳米粒子有着天然的磷脂膜结构,这相对于人工合成的磁性纳米粒子来说在生物兼容性方面是一大优势,利用其表面丰富的功能基团,可以加以修饰并应用于不同领域。本课题分别研究了BMP在作为药物载体和磷酸化肽段富集方面的应用,同时也对人工合成磁性纳米粒子在药物载体方面的应用做了相关研究。   一、使用BMP作为药物载体,通过双功能偶联试剂戊二醛(G),辛二酸二琥珀酰亚胺酯(DSS),3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)和N,N-二琥珀酰亚胺基碳酸酯(DSC)实现抗癌药物分子多柔比星(DOX)的偶联。戊二醛显示出最高的偶联效率,DOX的药物装载率为46.6%。所得的DOX偶联的BMP纳米粒子(DBMP)在溶液中分散均匀,粒径分布窄,平均粒径约为70 nm,对外加磁场有较高的响应,对人体肝癌细胞HePG2和人体乳腺癌细胞MCF-7也有着很强的毒性。   二、使用BMP作为药物载体,通过三功能偶联剂(TSAT)和多功能偶联试剂(PLGA)修饰BMP表面,并进一步连接药物分子DOX。相对于使用双功能的偶联剂,两者的药物装载率都有了很大的提高。通过TSAT和PLGA偶联的磁性纳米粒子(DBMP-T和DBMP-P)其药物装载率分别达到62.4%和81.7%。两种样品经一系列表征(红外,磁性和动力学光散射),结果表明随着功能基团的增加,在载体载药量增加的同时,虽然样品的饱和磁化率减小,但其细胞摄入量还是增加的。药物的释放也可以通过改变偶联剂或者缓冲液的pH来实现。   三、使用Fe3O4@SiO2作为原料,用硅烷偶联剂KH550通过物理包裹法将药物分子DOX分散到SiO2基质中,其载药量为0.7347 mg DOX每毫克载体,与使用双功能偶联试剂戊二醛接近。因采用物理方法制备,其释放速率和累计释放量相对于采用共价键偶联的样品有了一定程度的提高,72 h后pH为3.5累计释放量达到了60%。这类样品能够更加有效的利用药物分子,为了在某个区域达到一定的药物浓度,我们可以使用更少的载体就可以达到与其载药量相当的其它载药体系才能达到的效果。   四、使用BMP作为药物载体,选择了两种不同的氧化法(NaIO4法和NaClO/Tempo法)将BMP表面的甘油基团氧化为醛基,用于连接对肝癌细胞有靶向识别作用的2-氨基-D-半乳糖分子,再通过戊二醛偶联剂偶联药物分子DOX。两种方法制备的样品(DBMP-Gal)的载糖量和载药量分别为0.0296 mg糖/mg BMP,1.798 mg DOX/mg BMP(NaIO4法)和0.0338 mg糖/mg BMP,1.482mg DOX/mg BMP(NaClO/Tempo)。与DBMP相比,在相同的药物浓度下,DBMP-Gal对癌细胞有着更强的毒性,细胞摄入量也更大,这表明半乳糖的连接能进一步提高BMP的靶向性,结合BMP固有的磁性,可以实现药物载体磁性和配体的双重靶向。   五、使用BMP来快速富集并确定磷酸化肽段。BMP表面有着天然的磷脂膜,在不经过任何表面修饰的情况下,Fe3+和Zr4+可以很容易的固定到BMP的表面,固定了金属离子的BMP再通过强的配位作用来快速富集α-,β-和酪蛋白消解液中的磷酸化肽段。实验结果显示,Zr4+固定的BMP倾向于富集多磷酸化肽段,而Fe3+固定的BMP则倾向于富集单磷酸化肽段。BMP能够固定更多的Fe3+,因此Fe3+固定的BMP能够检测出比Zr4+固定的BMP更低浓度的磷酸化肽段。另外,BMP本身还可以通过与磷酸化肽段之间的弱相互作用选择性的富集α-酪蛋白消解液中的某一种特定的磷酸化肽段。
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