扁豆抗旱的生理基础与QTL分析及基因LpMYB1-like克隆

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本研究通过对扁豆不同资源在干旱胁迫条件下的生理生化反应进行研究,发现扁豆资源眉豆2012及南汇23在受到相同程度的干旱胁迫条件下,从根系鲜重、相对含水量、蒸腾效率、与抗旱相关的可溶性小分子(脯氨酸、可溶性糖)等生理指标及超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶活性等生化指标表现方面,眉豆2012干旱胁迫的抗性显著高于南汇23,为抗旱型品种。  通过正交设计实验对SRAP反应体系进行优化,发现dNTP及Mg2+浓度对PCR反应具有显著影响,确定SRAP-PCR在扁豆中的最优体系及反应条件。通过信息学手段新开发大豆中的EST-SSR标记,并验证其在扁豆中的通用性。发现大豆中的SSR在扁豆中的通用性为100%,且具有多态性。利用SRAP及SSR标记,以眉豆2012及南汇23杂交构建的F6代群体共114个单株为基础,进行遗传连锁图谱的构建。图谱共包含104个多态性位点,位点分布于14个连锁群上,图谱覆盖距离1735.9cM。同时利用构建的图谱对扁豆根系鲜重、根系干重及最长根长等3个与干旱抗性相关的农艺性状进行QTL定位,共检测到11个QTL位点,分别位于7个不同的连锁群上。  利用扁豆抗旱资源眉豆2012的苗期根系,构建干旱胁迫下的正向及反向抑制性消减杂交文库。通过文库筛选共得到表达水平存在1.5倍以上差异的序列1,287条,这些序列与大豆中的相关序列存在80.6%的同源性。同时分析发现这些基因涉及到苯丙氨酸代谢途径、黄酮合成途径、脯氨酸代谢途径等与逆境胁迫相关的途径。同时亦发现与抗旱生理指标变化相关的氨基酸、维生素、可溶性糖、激素及相关酶类合成及代谢途径中的酶编码基因序列。对正向文库中的序列表达分析发现,随着干旱程度的加深,文库中的基因表达上调可分为三个主要的类型。  对文库筛选得到的扁豆中与抗旱密切相关的转录因子LpMYB1-like进行克隆,并通过RACE技术获得该基因全序列。分析发现该基因全长1,093bp,为典型的R2R3-MYB转录因子结构,且在C端具有反式激活活性。该基因在不同组织中对干旱胁迫响应存在差异,其中在根组织中表达上调幅度最为明显。通过大豆毛状根转化分析发现,含有该基因的毛状根在胁迫条件下根系长度及鲜重增长显著快于未转化根系,该基因显著提高了毛状根对于干旱的抗性。表明扁豆LpMYB1-like基因具有抗旱的功能。
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