共表达猪生长抑素基因和PRRS病毒GPS基因的质粒DNA的动物免疫试验研究

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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种严重危害养猪业的传染病,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪及生长猪呼吸系统疾病。现有的商品化疫苗(灭活疫苗和弱毒疫苗)具有一定的免疫效果,但弱毒疫苗有毒力返强的危险,灭活疫苗可能出现接种反应。因此,迫切需要研制更加安全有效的疫苗用于PRRS 的防制。PRRS病毒(PRRSV)GP5 是一种多功能蛋白,含有与病毒中和作用相关的表位,参与细胞免疫与体液免疫,在免疫反应中起重要作用。PRRSV GP5 基因被认为是亚单位疫苗、重组活载体疫苗和DNA 疫苗的首选基因。生长抑素(somatostatin,SS)是生长激素的拮抗剂,用SS 免疫动物,能促进动物生长。先前报道的基于SS 的疫苗只具有促进动物生长的单一功能。如果能开发一种既能预防PRRS又能促进动物生长的新型疫苗,将更具有经济意义和应用价值。为了探讨编码猪SS 与PRRSV GP5 融合基因的质粒DNA 是否能促进猪只生长并诱导特异性抗体,本研究扩增并克隆了SS 基因片段,构建了共表达SS 与PRRSV GP5 基因的真核表达质粒pISG-SS/GP5,并用质粒pISG-SS/GP5 与空载体pISGRTK3 分别免疫BALB/c 小鼠和仔猪。挑取15 只4 周龄雌性健康BALB/c 小鼠,随机分为3 组,每组5 只,分别肌注pISG-SS/GP5、pISGRTK3 和生理盐水,一共免疫3 次(100μg/只),每次间隔2 周。首次免疫后第6 周和第8 周采血并分离血清,用于抗体检测。另选取体重接近的1 月龄PRRS 抗体阴性的健康断奶仔猪10 头,随机分为2 组,每组5 头,分别接种pISG-SS/GP5 或pISGRTK3。每头按600μg 剂量通过后腿肌肉(5/6 剂量)和腹股沟浅表淋巴结(1/6 剂量)注射,一共免疫3 次,每次间隔3 周。免疫前和免疫后每周定期在上午采食前采血、称重。用ELISA 和Western blot 检测免疫鼠和猪血清,结果表明,免疫鼠和猪都产生了抗PRRSV GP5 的特异性抗体。免疫猪称重结果显示,首次免疫后第19 周(试验结束)时,pISG-SS/GP5 免疫组比空载体对照组平均增重提高12.2%。本研究首次用编码SS 与PRRSV GP5 融合基因的质粒DNA 免疫猪,不但促进了猪的生长,而且诱导猪产生了特异性抗GP5 的抗体,表明DNA 疫苗可望作为一种新型的基因工程疫苗与促生长制剂,起到预防疾病和促进生长的双重作用。
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