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随着石油贮量的减少以及国际原油价格的不断攀升,生物柴油越来越受到人们的关注。目前,国内外用于生产生物柴油的原料主要是植物油,但原料成本占到总成本的70%~85%,而且包括生物柴油在内的生物能源的发展已经面临着“能源与人争粮”和“能源与人争地”的局面。产油微生物具有资源丰富、油脂含量高、碳源利用谱广等特点,开发潜力大,所以微生物油脂具有良好的发展前景,可能在未来生物柴油产业中发挥重要的作用。本研究的主要目标,是根据广东资源的特点,开发出以木薯为原料,通过产油微生物发酵产生油脂,为生物柴油产业的发展提供技术支撑。
本论文以木薯粉的两步法水解液为碳源,从6株产油酵母中筛出一株对水解液适应性较强的、生长较好、油脂含量较高的皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)As2.571。然后以As2.571为出发菌株,采用紫外线诱变处理,从所获得的突变株中复筛出一株高产油酵母突变株TC47。经连续8代PDA斜面培养与隔代发酵试验,TC47生物量、油脂产量稳定,且都高于其出发菌株。
为了提高突变株TC47的油脂产量,考察了培养基组成对该菌生长情况与油脂积累情况。采用单因素试验与正交试验结合对培养基组成进行优化,优化结果为当木薯粉水解液还原糖浓度llOg/L,酵母粉Ig/L,MgS04 0.8 g/L,NaAc 6g/L,菌体生物量可达22.59 g/L,油脂量为6.26 g/L。研究了添加无机盐离子对菌的生长及油脂积累情况,结果显示添加ZnS04和KH2P04对菌体生长和油脂产量有促进作用,添加量分别为30 mg/L、lg/L时,生物量增幅分别为11.20%、6.78%,油脂量增幅为13.90%、12.14%。
研究了影响TC47生长、油脂合成的多个发酵工艺条件,综合培养基组成优化结果,得出最佳发酵条件是:还原糖110g/L,酵母粉Ig/L,MgS04 0.8 g/L,NaAc6g/L,ZnS0430 mg/L,KH2P04 1 g/L,初始pH6,接种量为5%(种龄48h),在发酵24h后添加pH缓冲剂1 g/L CaC03,27℃,150r/min振荡培养7d,菌体生物量可达30.86g/L,油脂产量为10.63g/L。诱变株TC47与原始出发菌株As2.571相比,生物量提高3.01倍,油脂量提高5.14倍。油脂成分分析表明,菌株脂肪酸组成主要以16碳和18碳系脂肪酸为主,与植物油成分相似,可作为制备生物柴油的潜在原料。
考察了三株斯达氏油脂酵母As2.1560,As2.1608,As2.1390利用葡萄糖、木糖混合物为碳源发酵的情况。发现三株斯达氏油脂酵母都能较好的利用混合糖作为碳源发酵积累油脂,说明其同时具有利用葡萄糖、木糖的特性,这对以后继续研究木质纤维素的水解液混合糖发酵有重要意义。