LPS对母兔下丘脑、卵巢和输卵管上生殖激素受体表达影响的研究

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LPS是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分,LPS能够诱导机体产生与革兰氏阴性菌感染相似的病理反应。由于革兰氏阴性菌的感染,将导致雌性动物生殖机能紊乱,引发多种繁殖障碍疾病,降低家畜繁殖力。本研究利用LPS处理来模拟自然状态下母兔对革兰氏阴性菌的感染,目的在于揭示革兰氏阴性菌感染对血清生殖激素浓度及生殖激素受体在下丘脑、卵巢和输卵管的表达模式和表达水平的影响。5-6月龄健康雌性新西兰白兔按0.5mg/Kg剂量耳缘静脉注射LPS,对照组注射相同体积的生理盐水。在注射后0h(未处理)、1.5 h、3h、6h和12h(n=4)后宰杀,收集血液、下丘脑、卵巢和输卵管。采用酶联免疫法测定血清中的激素水平,采用荧光定量PCR和免疫组织化学在基因转录水平和蛋白水平分析生殖激素受体在下丘脑、卵巢和输卵管的表达模式和表达水平变化。ELISA分析表明:对照组中,GnRH,FSH、P4和E2在血清中的浓度在时间序列变化中差异不显著(P>0.05);LH的浓度在注射后3h和12h显著高于注射后1.5h和6h(P<0.05)。LPS组中,GnRH、FSH、LH、P4和E2在血液中的浓度在时间序列变化中差异不显著(P>0.05)。相同时间点上LPS组与对照组的比较显示:LPS注射后3h,FSH的浓度显著低于对照组(P<0.05);LPS注射后1.5h、3h、6h,E2的浓度显著低于对照组(P<0.05)。结果表明:LPS显著降低FSH、E2在血清中的浓度。荧光定量PCR分析表明:对照组中,GnRHR的转录水平在下丘脑随时间序列变化差异不显著;在卵巢注射后1.5h,GnRHR的转录水平显著高于Oh(P<0.05),在输卵管注射后3h,GnRHR的转录水平显著高于注射后6h(P<0.05);FSHR、LHR、PGR和PGRMCl的转录水平在下丘脑、卵巢和输卵管随时间序列变化差异不显著。LPS组中,GnRHR、FSHR、LHR、PGR和PGRMCl的转录水平在下丘脑、卵巢随时间序列变化差异不显著;GnRHR、 FSHR和LHR的转录水平在输卵管随时间序列变化差异不显著;LPS注射后1.5h,3h,6h和12h,PGR在输卵管的转录水平显著低于Oh组(P<0.05);LPS注射后6h,PGRMCl在输卵管的转录水平显著低于0h组(P<0.05)。相同时间点上LPS组与对照组的比较显示:LPS注射后1.5h,PGR在输卵管的转录水平显著低于对照组(P<0.05);LPS注射后12h,FSHR、LHR和PGRMCl在输卵管的转录水平显著低于对照组(P<0.05)。结果表明:LPS对FSHR、LHR、PGR和PGRMCl在输卵管的转录水平有抑制作用。GnRHR、FSHR和LHR免疫组织化学结果表明:LPS不影响GnRHR蛋白在下丘脑和原始卵泡卵母细胞的表达;促进初级卵泡和次级卵泡卵母细胞、次级卵泡和三级卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞,以及输卵管黏膜层GnRHR蛋白表达;对三级卵泡卵母细胞和输卵管肌肉层的GnRHR蛋白表达有双向调节作用。LPS对原始卵泡卵母细胞FSHR蛋白表达有抑制作用;对初级卵泡卵母细胞、三级卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞,以及输卵管黏膜层和肌肉层FSHR蛋白表达有促进作用;对次级卵泡卵母细胞和颗粒细胞FSHR蛋白表达没有影响;对下丘脑、三级卵泡卵母细胞和次级卵泡颗粒细胞FSHR蛋白表达有双向调节作用。LPS对下丘脑、原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡卵母细胞、次级卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞以及输卵管肌肉层LHR蛋白表达有抑制作用;对三级卵泡卵母细胞、颗粒细胞和卵泡膜细胞、输卵管黏膜层LHR蛋白表达有双向调节作用。
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