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目的:观察雌激素对载脂蛋白AⅠ(Apo AⅠ)基因转录的影响;探讨Apo AⅠ基因启动子不同区域及ApoCⅢ/AⅣ基因调控元件在Apo AⅠ基因转录调控中的作用,分析雌激素刺激对apoAⅠ基因表达的调节机制。方法:1.分别将0.01、0.1、1、10、20μmol/L雌激素与体外培养的HepG2细胞共同孵育24h;选用10μmol/L的雌激素与HepG2细胞共同孵育0h、1h、6h、24h、48h;分别提取总RNA,采用半定量RT-PCR方法测定Apo AⅠmRNA表达水平,观察不同剂量雌激素和不同刺激时间对Apo AⅠmRNA表达的影响。2.以携带萤火虫荧光素酶报告基因的质粒pGL2为载体,构建携带ApoAI基因启动子不同长度片段的重组质粒pGL2/-41AⅠ、pGL2/-256AⅠ和pGL2/-2500AⅠ,以及同时携带ApoCⅢ/AⅣ基因的重组质粒:pGL2/-41AⅠCⅢAⅣ、pGL2/-256AⅠCⅢAⅣ、pGL2/-2500AⅠCⅢAⅣ;采用阳离子脂质体法分别将重组质粒与携带海肾荧光素酶报告基因的pRL-null质粒内参进行双质粒共转染,并在HepG2细胞中表达;转染24小时后给予10μmol/L雌激素刺激,48小时后收集、裂解细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶报告基因的荧光强度。结果:1.在体外培养的HepG2细胞中,随雌激素浓度的增加,Apo AⅠmRNA表达呈现先升高后降低的趋势,以非生理剂量10μmol/L时Apo AⅠmRNA表达最高,与空白对照组及生理剂量浓度组(0.01、0.1、1μmol/L)相比有明显差异(P<0.05),20μmol/L时Apo AⅠmRNA表达降低,低于10μmol/L时,但仍高于空白对照及生理剂量组。2.随加入雌激素刺激时间的延长,HepG2细胞中Apo AⅠmRNA表达呈现先升高后降低的趋势,雌激素刺激6h后ApoAⅠmRNA表达水平增加,与0h、1h表达水平相比差异有统计学意义(P<0.05);刺激24h后Apo AⅠmRNA表达水平最高(P<0.05),48h后Apo AⅠmRNA表达水平下降,与24h相比差异有统计学意义。3.包含ApoAI基因启动子-256bp~+397bp和-2500bp~+397bp片段的重组质粒转染HepG2细胞后表达的荧光素酶的相对活性明显高于只含有-41bp~+397bp片断的重组质粒;同时携带ApoCⅢ/AⅣ基因片段的重组质粒亦显示相似的结果。4.同时携带ApoCⅢ/AⅣ基因和ApoAⅠ基因启动子不同长度片段的重组质粒转染HepG2细胞后表达的荧光素酶的相对活性明显高于只连接Apo AⅠ不同启动子区域的重组质粒pGL2/AⅠ,差异有统计学意义(P<0.05)。5.重组质粒pGL2/-256AⅠ及pGL2/-2500AⅠ及pGL2/-256AⅠCⅢAⅣ及pGL2/-2500AⅠCⅢAⅣ转染的HepG2细胞其表达的荧光素酶的相对活性雌激素组明显高于对照组(P<0.05),而pGL2/-41AⅠ及pGL2/-41AⅠCⅢAⅣ质粒转染后表达的荧光素酶相对活性在雌激素刺激前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.随雌激素浓度的增加,体外培养的HepG2细胞中Apo AⅠmRNA表达呈现升高趋势,以浓度为10μmol/L时表达水平最高;以该浓度刺激6h后表达水平开始增加,24h达高峰,本研究显示雌激素可在转录水平调节Apo AⅠ基因表达,并呈现部分的剂量和时间依赖性。2.Apo AⅠ基因转录起始点上游-256bp区域至上游-41bp区域,具有较强启动子转录活性,可能与该区域内含有肝特异性增强子有关。含有-2500bp~+397bp片段与-256bp~+397bp片段相比,荧光强度虽有增强,但无统计学意义,显示Apo AⅠ基因启动子-256bp上游区域可能缺乏调控的顺式作用元件。同时携带ApoCⅢ/AⅣ基因的重组质粒的荧光强度明显高于只含有Apo AⅠ基因片段的重组质粒,表明Apo CⅢ/AⅣ基因调控区内存在调节Apo AⅠ基因转录增强的作用元件。3.转录起始点至上游-41bp区域的Apo AⅠ启动子对雌激素无明显反应,包含-256bp区域的Apo AⅠ启动子受雌激素刺激转录活性增强,此区域可能是最小雌激素反应元件,ApoCⅢ/AⅣ基因调控区不受雌激素作用的影响。