目的:考察不同浓度葡萄糖对H9c2心肌细胞增殖活性和氧化应激的影响,构建体外高糖微环境。研究罗格列酮（RSG）对高糖微环境下H9c2细胞氧化应激、能量代谢和细胞凋亡的影响。方法:（1）构建体外高糖微环境:将含有不同浓度葡萄糖培养基处理的心肌细胞分别培养24 h、48 h和72 h,利用倒置显微镜观察心肌细胞形态学变化,噻唑蓝（MTT）法检测心肌细胞活性,酶标法检测还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量,四唑盐（WST-1）法检测超氧化物歧化酶（SOD）活力,流式细胞法检测活性氧（ROS）水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测肿瘤坏死因子（TNF-α）和转化生长因子（TGF-β1）。（2）筛选RSG浓度及时间:采用MTT法测定不同浓度RSG作用24 h、48 h和72 h对高糖微环境下H9c2心肌细胞活性的影响,倒置显微镜观察细胞形态变化,确定RSG体外心肌实验的低、中、高浓度及最佳作用时间。（3）RSG对细胞的影响:RSG低、中、高浓度作用高糖微环境下H9c2心肌细胞48 h后,检测GSH、MDA含量和SOD活力,流式细胞法检测ROS水平,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,罗丹明123（Rh-123）检测心肌细胞线粒体膜电位（MMP）,反相高效液相色谱法（RP-HPLC）检测心肌细胞中ATP、ADP和AMP含量。结果:（1）33.30 mmol·L^-1葡萄糖组作用心肌细胞24 h后,与正常葡萄糖组(25 mmol·L^-1)比较,细胞活性、SOD活性和GSH含量均明显降低（P<0.05）,而ROS水平明显升高（P<0.05）,MDA含量升高,炎症因子TNF-a、TGF-β1的浓度均显著增加（P<0.05）。33.30 mmol·L^-1葡萄糖、24 h是抑制细胞增殖形成氧化应激的浓度和时间折点。（2）MTT实验结果,RSG处理心肌细胞48 h能获得良好的抑制规律曲线(R²=0.9861,IC₅₀为456.31μmol·L^-1),因此确定48 h为处理时间。筛选得到RSG作用48 h的低、中、高浓度分别为340.00μmol·L^-1、450.00μmol·L^-1和560.00μmol·L^-1。与对照组(5.56 mmol·L^-1)比较,RSG使细胞GSH含量减少、SOD活力降低,MDA含量增加,ROS水平升高;MMP和线粒体内5’-三磷酸腺苷（ATP）含量显著降低,5’-二磷酸腺苷（ADP）和5’-磷酸腺苷（AMP）含量显著升高,心肌细胞凋亡率明显增加,具有统计学意义（P<0.05）。（3）ATP、ADP和AMP的RP-HPLC分析方法:Agilent ZORB-AX SB-C₁₈柱（4.6mm×150 mm,5μm）,流动相为0.2 mol·L^-1磷酸盐缓冲液（含0.805 g四丁基溴化铵）∶甲醇=95∶5,柱温35°C,流速1 mL·min^-1,紫外检测波长258 nm。ATP、ADP和AMP的保留时间分别为11.8 min、7.5 min和4.3 min。ATP、ADP和AMP分别在0.75⁴8μg·mL^-1、0.50³2.00μg·mL^-1、0.25¹6.00μg·mL^-1范围内线性关系良好。ATP、ADP和AMP的最低定量限（LLOQ）分别为0.75μg·mL^-1、0.50μg·mL^-1和0.25μg·mL^-1（S/N=10）;平均提取回收率在65.28%⁸1.08%范围内,日内相对标准偏差（RSD）、日间RSD和稳定性RSD均<15%。结论:（1）高糖微环境是抑制心肌细胞增殖,诱导细胞氧化应激的重要因素。33.30 mmol·L^-1葡萄糖作用H9c2心肌细胞24 h是构建体外高糖微环境的最佳浓度与时间。（2）研究建立了能同时测定ATP、ADP和AMP含量的RP-HPLC分析方法,精密度、准确度符合要求且稳定性良好。（3）RSG浓度大于340.00μmol·L^-1可能通过影响心肌细胞氧化应激、能量代谢,诱导细胞凋亡产生心肌损害作用。