Phytophthora和Pythium的许多种能向细胞外分泌一类小分子量的蛋白质，统称为elicitins。Elicitins在烟草上能引起过敏反应（hypersensitive response，HR）和系统获得抗性（systemic acquired resistance，SAR）。Elicitins-烟草互作体系是研究信号识别、信号传导等诸多问题的良好体系。本论文报告作者对烟草寄生疫霉（Phytophthora parasitica var. nicotianae）中国菌株的elicitin基因进行克隆、表达及其诱导植物抗病性方面的研究结果。根据已报道的寄生疫霉parA1基因的序列设计引物，从4株寄生疫霉不同寄主分离物（3株来自烟草，1株来自刺槐）中克隆到此基因，序列分析表明4株寄生疫霉parA1基因序列高度保守。然后研究了parA1在大肠杆菌（Escherichia coli）中的表达。对表达载体pET30a(+)双酶切(NdeⅠ-BamHⅠ)，构建表达elicitin蛋白的表达载体pET-eli，用CaCl2法转化大肠杆菌BL21菌株，通过IPTG诱导在大肠杆菌中产生的蛋白在烟草上引起过敏性坏死反应。对重组蛋白性质测定表明，重组蛋白有一定的耐热性，并对蛋白酶K敏感。至此，我们已成功地从寄生疫霉中国菌株中克隆到了parA1基因，并建立了大肠杆菌重组表达体系。在获得重组蛋白的基础上，测定了其诱导烟草和番茄对真菌、细菌和病毒病的抗病诱导作用。对不同浓度的elicitin进行诱导作用比较，此重组蛋白在30nM时，喷洒诱导烟草后产生最高的抗TMV的诱导作用；诱导作用可维持至少20天，其中在第4-5天诱导效果最好。因此，在elicitin诱导植物时，最好使用30nM浓度，并在诱导后第4-5天挑战接种可产生最大的诱导效果。用30nM的elicitin处理烟草和番茄，第4天接种测试的病原物，烟草经诱导后，烟草能抗TMV(tobacco mosaic virus)、烟草黑胫病菌(P. parasitica)、烟草赤星病菌(Alternaria longipes)和烟草青枯病菌(Pseudomonas solanacearum)，诱导作用分别是74.1%、63.8%、50.6%和45.0%；番茄经诱导处理后抗青枯病（P. solanacearum），诱导作用为43.1%。因此elicitin的抗病诱抗作用是非特异的。植物诱导抗性通常与过敏反应（HR）及病程相关（PR）等基因的表达相关联，而这些反应受信号分子水杨酸的调控，在不同体系中，还有H2O2等信号分子及Ca2+通路因子的参与。为了明确elicitin诱导HR的上游信号传导因子，对elicitin处理后<WP=8>植株体内SA、H2O2的积累及Ca2+通道相关反应作了测定。烟草经elicitin诱导处理后，体内水杨酸含量比对照提高了1.65-2.88倍，其中在诱导后的第1天和第4天各有一个峰值。用Ca2+通道阻断剂La3+与elicitin同时注射烟草叶片发现过敏基因HIN1表达被抑制，表明HIN1的表达依赖于胞外Ca2+。在elicitin处理烟草后，过氧化氢酶（CAT）的活性下降1.15-1.62倍；相应地，elicitin处理的烟草植株体内H2O2迅速积累，但在测定的时间内没有出现“氧化迸发”，H2O2含量只是在elicitin注射叶片后的第5和9小时各出现了两个小峰，并且H2O2的增加是系统性的，即不但处理叶片有量的积累，而且非处理叶片也有量的增加。根据这些现象，elicitin诱导HR的过程有SA、Ca2+通道因子和活性氧的参与。为了明确上述信号分子的变化是否与HR相关，我们研究了elicitin诱导的细胞快速死亡及HR的分子表征。用elicitin注射烟草后0.5小时，HR的表征基因HIN1表达，在7小时内表达量逐渐变弱，而最终在12-16小时可观察到HR。HR的另外的表征分子苯丙氨酸裂解酶（PAL）和PR基因的表达。在烟草受elicitin处理后的6天内，PAL活性出现了2个峰，活性水平高出对照1.13-2.44倍。Elicitin喷洒诱导后，检测了防卫基因PR-1b的表达情况。PR-1b在诱导1天后就有表达而并在测定的5天内都有一定量的表达。用150nM的elicitin喷洒烟草叶片，经trypon-blue染色，在12小时可观察到有细胞坏死，说明elicitin引起了micro-HR，而水和低浓度的elicitin不能引起micro-HR；同时发现注射引起HR的elicitin浓度远比引起micro-HR的浓度低。证实能产生HR的激发子的诱导作用不见得要伴随micro-HR