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目的:评估重组梅毒螺旋体(Tp)黏附素蛋白Tp0750(rTp0750)在新西兰兔体内诱导的免疫保护性及体外诊断价值,以筛选新的梅毒候选疫苗分子与诊断抗原。方法:1.构建原核表达载体pET-28a/Tp0750,转化入大肠埃希菌中诱导表达rTp0750并以Western blot鉴定;2.将新西兰兔随机分为三个组,即A:rTp0750(实验组),B:rTp0751(阳性对照组),C:PBS(阴性对照组),用纯化重组蛋白/PBS肌注和皮下注射新西兰兔,间隔两周共免疫四次,每次免疫前收集血清检测特异性IgG抗体水平;取末次免疫后2周兔脾细胞,用CCK-8细胞增殖试剂盒及逆转录PCR(RT-PCR)试剂盒分别检测脾淋巴细胞增殖及IFN-γ的mRNA转录水平;同时在新西兰兔背部皮内注射Tp攻击感染,观察皮损直径变化及皮肤溃疡形成,实时荧光定量PCR(qPCR)检测新西兰兔不同组织部位Tp-DNA载量,光镜下观察皮损与肾脏病理组织中炎症细胞浸润。3.建立基于rTp0750的间接ELISA,检测不同时期的梅毒患者血清、正常人血清、交叉血清的特异性IgG抗体水平,评估Tp0750的诊断价值。结果:1.Western blot结果显示,所构建原核表达重组质粒pET-28a/Tp0750表达一分子量25kDa大小的特异性蛋白;2.A与B组在免疫后第2周出现相应特异性抗体并逐渐增加,于第8周达到高峰(P<0.01),此时B组特异性IgG滴度高于A组(P<0.05);3.CCK-8结果显示,A组与B组兔淋巴细胞的刺激指数(SI)均明显高于C组(P<0.01),但A组与B组之间无明显差异;qPCR结果显示,A组与B组兔脾细胞中IFN-γ转录水平均明显高于C组(P<0.01),B组高于A组(P<0.05);4.攻击后第14天A组和B组皮损直径均小于C组(P<0.01),B组小于A组(P<0.05);攻击后第21天,A组和B组皮肤溃疡发生率组小于C组,B组低于A组;5.qPCR结果显示,Tp载量最多的部位为皮肤与血液;皮损中Tp载量三组间无明显差异,但兔肝脏、脾脏、血液、肾脏组织中Tp载量A组与B组明显少于C组(P<0.01),A与B组间无明显差异;6.组织病理结果显示,三组兔皮损部位均出现炎性细胞浸润,但C组炎性细胞数量少于A组与B组,A组与B组无明显差异;C组兔肾脏出现明显地炎性细胞浸润,而A组和B组不明显;7.Tp0750-ELISA检测临床样本结果显示灵敏度为51.7%,特异度95.2%。结论:1.rTp0750可在新西兰兔体内诱导高水平的特异性抗体产生和细胞免疫应答;2.rTp0750免疫新西兰兔有效减轻感染部位皮损发展并抑制Tp在体内播散;3.Tp0750具有较高的诊断特异性但灵敏度较低,不适于作为梅毒血清学诊断抗原。