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呼吸道疾病是影响包括鼻腔通道、支气管和肺部在内的气道疾病,其范围包括从急性感染(例如肺炎和支气管炎),到慢性病症(例如哮喘和慢性阻塞性肺病),严重威胁人类的健康。快速、准确的检测呼吸道中的致病菌是有效诊断和治疗病原菌感染的前提条件。
传统的检测手段包括细菌培养方法及生化鉴定,操作繁琐,且需要数天才能得到结果。免疫学方法和探针杂交技术也存在特异性或敏感性的问题。常规PCR一次只能检出有限的几种致病菌,对呼吸道中分离的未知菌,或有多种细菌污染的样品则显得无从下手。本文的研究目的是建立一种液相基因芯片快速检测呼吸道中常见致病菌的方法,检测的目的菌株包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉氏菌、化脓链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌和嗜肺军团菌。
液相芯片技术(xMAP)将流式检测与芯片技术有机地结合在一起,使得生物芯片反应系统由液相-固相反应改变为接近生物系统内部环境的完全液相反应体系,该技术是一个灵活的、开放的技术平台,根据待检测生物分子的不同,xMAP技术可以根据需要进行相应的构建,而达到检测不同生物分子的目的。
本文利用16S rRNA-23S rRNA基因的间区(ITS)作为靶序列,筛选出针对肺炎链球菌等9种致病菌的特异分子标识,并研制了呼吸道致病菌的液相基因检测芯片。
本研究建立的运用液相基因芯片技术的检测方法具有操作简便,快速、特异性强、灵敏度高、准确性好等特点,为今后在呼吸道致病菌检测、鉴定领域开展进一步的研究和更大规模的使用提供了一定的技术和理论参考,具有广阔的应用前景,如可用于医学检验、食品卫生检测、环境监测、出入境检验检疫、卫生监督等领域。