全反式维甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)分化治疗急性早幼粒细胞白血病的成功，使其作为诱导分化剂的代表，一度成为抗肿瘤研究的热点。然而，维甲酸综合症等不良反应的发生，限制了其在临床的进一步推广应用，因而，开发新型、高效、低毒的诱导分化剂成为抗肿瘤治疗的主要研究方向之一。本课题组以全反式维甲酸为原料，合成了一系列维甲酸衍生物，抗肿瘤活性的筛选，4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)的药理活性较高，不仅对白血病细胞有较好的抑制增殖和诱导分化作用，体外研究还证实其对多种消化道实体瘤也具有诱导分化作用。本实验通过建立人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠移植模型，探究ATPR在体内对胃癌细胞的作用，为其临床应用提供实验依据。并通过RNA干扰技术(RNA interference)靶向沉默SGC-7901细胞的RARβ基因后使用ATPR，观察ATPR对SGC-7901细胞增殖分化能力的影响，旨在初步阐明ATPR抗SGC-7901增殖及诱导分化作用的机制。目的：本研究旨在观察新型维甲酸衍生物ATPR对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的药效学作用及靶向沉默RARβ基因后对SGC-7901细胞增殖分化能力的影响。方法：1SGC-7901细胞皮下接种：雄性裸小鼠10只于SPF级条件下适应性饲养1周，对数生长期的细胞经胰酶消化收集，每只小鼠注射2×106个细胞。待其瘤体长至1cm3左右时，断颈处死小鼠，无菌条件下取出瘤体充分剪碎，皮下注射到传代裸鼠腋窝处。三代以后，瘤组织作为瘤源皮下移植到103只雄性裸小鼠腋窝处。2分组及给药方法：一周后，将91只成瘤小鼠随机分为6组：模型组；溶剂组；ATRA组(10mg/kg)；ATPR组(5mg/kg，10mg/kg，20mg/kg)。溶剂组注射聚氧乙烯蓖麻油：PBS=9:1(溶剂)，加药组分组后开始腹腔注射相应剂量的药物，每隔一天给药一次，连续5周。3疗效评价：接种后，观察和记录动物死亡时间，统计生存天数，计算生命延长率。4其它辅助评价疗效指标的研究：(1)移植瘤重量及体积检测。(2)细胞形态学变化：肝、脾、肾、肺及瘤体用10％甲醛固定48h以上，石蜡包埋，切片，苏木素-伊红(HE)染色，镜下观察上述组织形态。(3)瘤体石蜡切片，经过滴加羊抗人COX-2/CEA多克隆抗体，再滴加生物素标记的二抗等处理。镜下观察COX-2及CEA的表达变化情况。(4)流式细胞术检测瘤细胞周期：称取适当瘤体研磨，70%乙醇-20℃冰箱固定过夜，碘化丙啶（PI）避光染色30min，流式细胞仪检测104以上细胞。(5)检测血清碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活力：眼球取血，静置，离心吸取上清，按照碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶试剂盒说明书检测两者活性。5机制研究：采用RT-PCR、Western Blot技术检测ATPR引起的SGC-7901细胞中RARβmRNA及蛋白的表达变化。并采用RNA干扰技术，体外观察siRNA序列靶向沉默SGC-7901细胞RARβ后6h加入ATPR(终浓度为10-5mol/L)，对细胞增殖及相关酶活性的影响。探究RARβ在介导ATPR作用于SGC-7901细胞中的作用。结果：1瘤组织块悬液注入小鼠腋窝一周后，即可见皮下绿豆般白色小突起，说明模型建立成功。2新型维甲酸衍生物ATPR能够延长移植瘤裸小鼠的生存期。3皮下移植瘤小鼠肝、脾、肾、肺等内脏器官镜下与正常小鼠比较未发现明显的病理改变。各组小鼠瘤体细胞在镜下观察呈圆形，核大，畸形，排列呈巢状或索状，血窦丰富，模型组和溶剂组在镜下可见部分肿瘤细胞有2个或3个核，中高剂量组可见部分细胞固缩凋亡。4环氧合酶-2(COX-2)免疫组化阳性物质定位于细胞质，呈棕黄色或棕褐色，用IPP软件分析光密度值，ATPR高剂量组及ATRA阳性药组瘤体COX-2表达较模型组和溶剂组明显降低。5癌胚抗原(CEA)免疫组化CEA蛋白阳性表达于细胞膜和细胞浆，呈棕色，用IPP软件分析光密度值，ATPR高剂量组及ATRA阳性药组瘤体CEA表达较模型组和溶剂组显著降低。6ATPR对裸小鼠移植瘤的生长具有抗增殖作用：流式细胞术检测发现用药组移植瘤G0/G1期细胞增多。7ATPR对裸小鼠移植瘤的生长具有诱导分化作用：分化标志酶ALP和LDH检测显示用药组两者活性均下降。8MTT法和流式细胞术结果显示：靶向沉默RARβ基因6h后加入ATPR及ATRA作用72h，siRNA-RARβ组、siRNA-RARβ+ATPR组及siRNA-RARβ+ATRA组与未转染直接加ATPR组相比细胞生长显著增多，此三组之间及与空白组相比无显著性差异。72h后，ATPR组与空白组相比，细胞增殖却明显减弱。9碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶活力检测显示：RARβ转染沉默后加药组两种肿瘤标志酶的活力都较直接加药组明显增高。结论：1向裸鼠注射SGC-7901细胞株能够成功建立胃癌小鼠移植模型。2新型维甲酸衍生物ATPR可以延长胃癌移植小鼠的生存期，使分化标志酶碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶活力下降，使与胃癌发生发展密切相关的环氧合酶-2及癌胚抗原表达下降。3推测ATPR对SGC-7901细胞发挥诱导分化作用的机制途径之一是通过与RARβ受体结合，特异的结合到靶基因调控区的维甲酸应答元件(RARE)上，从而调节SGC-7901细胞的增殖和分化。