拟除虫菊酯类农药法医毒物动力学研究(一)

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目的:1.建立家兔拟除虫菊酯类农药灌胃染毒致死模型。2.建立拟除虫菊酯类农药气相色谱、气相色谱/质谱联用检测方法。3.研究拟除虫菊酯类农药在灌胃染毒致死家兔体内的分布。方法:1.动物模型建立家兔24只,随机分为实验组(15只)和对照组(9只),实验组分为氰戊菊酯组,甲氰菊酯组和氯氰菊酯组,分别经口灌胃染毒1.64g/kg、0.65g/kg和0.53g/kg,对照组家兔注入等体积生理盐水。2.观察从开始染毒到动物死亡的中毒症状。3.样品采集与处理家兔灌胃后,实验组家兔血压、呼吸和心电全部消失后,迅速解剖动物,取全部心血、外周血、胆汁、尿和部分心、肝、脾、肺、肾、脑、胃壁等组织,放置于-20℃冰箱内保存待检。另一部分心、肝、脾、肺、肾、脑、胃和肌肉等组织用4%甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE染色,光镜下观察。4.拟除虫菊酯类农药分析样品经酸处理后,三氯甲烷萃取,气相色谱和气相色谱-质谱联用检测,根据三种拟除虫菊酯类农药各自的特征离子峰、保留时间定性与内标法、工作曲线法定量。结果:1.症状实验组家兔在经口灌胃后出现中毒症状,染毒后2-3h部分实验家兔出现湿毛,角弓反张,大小便失禁,痉挛,角膜反射减弱或消失,肌张力下降,呼吸减弱或消失。三种拟除虫菊酯农药染毒家兔分别于染毒后9.97±3.97h、6.37±2.71h和7.95±3.15h死亡。对照组家兔未出现以上症状,未死亡。拟除虫菊酯农药致死家兔主要脏器病理改变基本相似,为一般中毒表现。2.气相色谱法:本研究建立气相色谱检测生物样本中拟除虫菊酯类农药的方法,达到良好的分离,线性范围为2-400μg/g或μg/ml,最低检出浓度是0.125μg/g或μg/ml,回收率均在95%以上。3.家兔体内的拟除虫菊酯类农药分布实验组家兔体内拟除虫农药的平均含量从高到低依次为:氰戊菊酯组:胃壁、肝、脾、大脑、肺、胆汁、心、肾、周围血、心血;甲氰菊酯组:胃壁、肾、肝、大脑、心、脾、胆汁、肺、周围血、心血;氯氰菊酯组:胃壁、肝、肾、心、肺、尿、脾、大脑、周围血、心血胆汁。结论:1.本研究建立了三种拟除虫菊酯类农药灌胃染毒致死的动物模型,三种拟除虫菊酯农药染毒家兔分别于染毒后9.97±3.97h、6.37±2.71h和7.95±3.15h死亡。本模型可应用于拟除虫菊酯类农药意外死亡和中毒案件的法医学研究。2.三种拟除虫菊酯类农药经口灌胃致死家兔体内分布趋势分别为氰戊菊酯组:胃壁、肝、脾、大脑、肺、胆汁、心、肾、周围血、心血;甲氰菊酯组:胃壁、肾、肝、大脑、心、脾、胆汁、肺、周围血、心血;氯氰菊酯组:胃壁、肝、肾、心、肺、尿、脾、大脑、周围血、心血胆汁。为拟除虫菊酯类农药中毒致死案件的检材采取、检测、结果分析、死因判定及法医学鉴定提供科学依据。3.拟除虫菊酯类农药意外死亡和中毒案件进行法医学鉴定时,除常见检材心血和外周血外仍需采取肝、肾、胆汁、心、脾、脑等组织进行全面的农药定性和定量分析,并结合症状及体征发现进行综合判定。
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