论文部分内容阅读
[目的] 研究神经干细胞移植到成年大鼠纹状体后，在宿主脑内的存活、迁移、分化等行为，为脑内细胞移植提供基础实验证据；探讨神经干细胞移植对PD模型动物的治疗改善情况。 [方法] 实验从E14胎鼠脑室下带区（subventricular zone，SVZ）分离培养神经干细胞。采用神经球培养方法，获得大量的细胞克隆。分别用抗Nestin抗体、抗NF抗体、抗GFAP抗体和抗CNP抗体，对培养的细胞进行干细胞特性和多分化潜能的免疫组织化学鉴定。 原代培养的神经干细胞经3次传代培养之后，选择生长状态良好的神经干细胞用AAV2-GFP感染标记，把带有GFP标记的神经干细胞移植到成年大鼠纹状体中。于细胞移植后的45天、90天和120天时分别灌流固定实验大鼠，对固定后的大脑进行矢状冰冻切片，荧光显微镜下观察并配合免疫组织化学方法，研究移植细胞在大鼠脑内的存活、迁移、分化等行为。 向健康成年大鼠的前脑内侧束部位注射适量6-羟多巴胺（6-OHDA），建立帕金森病的大鼠模型，一个月后，用阿扑吗啡诱导模型大鼠旋转，符合行为学要求的视为PD模型建立。对成功建立帕金森病模型的大鼠，向其脑内纹状体部位进行神经干细胞移植，研究神经干细胞移植对PD模型大鼠的治疗改善情况。 [结果] （1） 从E14胎鼠的SVZ部位分离得到的细胞具有增殖和形成神经球的能力，神经球表达Nestin，神经球分化后的细胞分别对NF、GFAP、CNP具有免疫阳性反应。 （2） AAV2-GFP感染标记的神经干细胞在荧光显微镜下呈现绿色荧光，分化后的GFP标记细胞从胞体到突起整个细胞都有绿色荧光标记。 （3） 在神经干细胞移植后的各时间点，宿主脑内都有大量标记细胞存在。 （4） 神经干细胞移植后45天，细胞迁移表现出明显的方向性。神经干细胞移植后90天，多数细胞表现为朝向腹后侧迁移，迁移出的最远距离为1.0mm。神经干细胞移植后120天，迁移的细胞主要表现为两条迁移路线：一条细胞沿弧形路线向背后