蒙药芯芭抗糖尿病活性成分筛选及其作用机制初探

来源 :内蒙古科技大学包头医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:z534921
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目的明确蒙药芯芭的物质基础,并对其抗糖尿病作用机制进行初步的探讨。方法将达乌里芯芭乙醇提取物制备成水、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚不同极性部位。首先,通过α-葡萄糖苷酶抑制作用实验,Hep G2细胞胰岛素抵抗实验及INS-1胰岛细胞实验对达乌里芯芭不同极性部位进行活性筛选。其次,利用现代先进的分离纯化手段从活性部位中制备单体化合物。同时采用UPLC-Q-Exactive四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪联用技术明确达乌里芯芭活性部位中的化学成分。然后利用高效液相色谱法对达乌里芯芭活性部位中含量较高、具有潜在的活性成分进行含量测定,完成蒙药芯芭的物质基础研究;同时对达乌里芯芭活性部位中含量较高、具有潜在的活性单体成分通过α-葡萄糖苷酶抑制作用实验及INS-1胰岛细胞实验进行验证。最后,检测达乌里芯芭中的具有活性的苯乙醇苷类化合物对四氧嘧啶诱导INS-1细胞胰岛素分泌、SOD活性及MDA含量的影响,并通过qRT-PCR及Western blot检测其对四氧嘧啶诱导INS-1细胞Caspase-3、Bax、Bcl-2 m RNA表达及蛋白表达的影响,对达乌里芯芭抗糖尿病作用机制进行探讨。结果(1)达乌里芯芭乙酸乙酯部位对α-葡萄糖苷酶抑制活性显著(IC50为105.9±0.89μg/m L),且与阳性对照阿卡波糖组(IC50为108.2±1.28μg/m L)相比较无显著性差异(P>0.05)。(2)不同浓度达乌里芯芭正丁醇部位及乙酸乙酯部位对Hep G2细胞胰岛素抵抗具有改善作用。(3)不同浓度达乌里芯芭正丁醇部位及乙酸乙酯部位对四氧嘧啶诱导INS-1细胞损伤具有保护作用。(4)从达乌里芯芭活性部位(即正丁醇部位及乙酸乙酯部位)中分离得到10个单体化合物:梓醇(化合物1)、香草酸(化合物2)、益母草苷(化合物3)、肉苁蓉苷F(化合物4)、松果菊苷(化合物5)、三糖苯丙素苷(化合物6)、毛蕊花糖苷(化合物7)、异毛蕊花糖苷(化合物8)、芹菜素(化合物9)、苜蓿素(化合物10),其中化合物2、4、5、6、7、8、10首次从达乌里芯芭中分离得到。此外,本研究首次在达乌里芯芭中发现苯乙醇苷类化合物。(5)经UPLC-MS结果分析从达乌里芯芭活性部位中共鉴定出30个化合物,初步明确了蒙药芯芭的物质基础。(6)建立了一种同时测定达乌里芯芭活性部位中5种成分的高效液相色谱方法,结果表明苯乙醇苷类化合物为其主要成分之一。(7)毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷及三糖苯丙素苷对α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC50分别为247.3±2.393μg/m L、366.5±2.5641μg/m L、248.6±2.396μg/m L。其中抑制活性最强的是毛蕊花糖苷,但与阳性对照药阿卡波糖(117.4±2.070μg/m L)相比具有显著性差异(P<0.01)。(8)不同浓度的毛蕊花糖苷与异毛蕊花糖苷对四氧嘧啶诱导INS-1细胞损伤具有保护作用,且毛蕊花糖苷与异毛蕊花糖苷在浓度100μM时保护作用最强。(9)毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷能够增强四氧嘧啶诱导INS-1细胞的胰岛素分泌、SOD活性,降低MDA含量,增强INS-1细胞的抗氧化能力并减轻四氧嘧啶对INS-1细胞自由基损伤(P<0.05)。(10)毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷可以显著降低四氧嘧啶引起的Caspase-3、Bax m RNA表达量升高,并在一定程度上可以逆转四氧嘧啶引起的Bcl-2 m RNA的表达量下降。同样地,毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷能够下调四氧嘧啶引起的Caspase-3、Bax蛋白表达量升高,上调四氧嘧啶引起的Bcl-2蛋白表达量下降。结论(1)达乌里芯芭抗糖尿病活性部位主要为正丁醇及乙酸乙酯部位,其化学成分主要分为苯乙醇苷类、黄酮类、环烯醚萜类和酚酸类。(2)初步证实了蒙药芯芭通过抑制α-葡萄糖苷酶活性、改善胰岛素抵抗、改善胰岛细胞损伤的机制来发挥抗糖尿病作用。
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