RNA干扰沉默PDGFr-β基因对大鼠C6胶质瘤细胞增殖及放射敏感性的影响

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目的:探索RNA干扰抑制PDGFR-β的表达对大鼠C6胶质瘤细胞增殖的影响,及是否有放疗增敏作用。  方法:构建PDGFR-β-shRNA慢病毒干扰载体,转染至大鼠C6胶质瘤细胞中,将细胞分为NC(Negative Control,NC)组、KD(KnockDown,KD)组。用western-blot检测干扰后C6细胞中PDGFR-β的蛋白表达抑制水平。用MTT法比较两组细胞的生长曲线。用克隆形成实验检测两组联合放疗后细胞的存活率及放射敏感性。流式细胞仪检测两组联合放疗后细胞的周期分布。  结果:慢病毒载体转染C6细胞后,荧光显微镜下观察荧光率大于80%,表明转染成功。Western-blot检测KD组细胞中PDGFR-β的蛋白表达水平明显下降,且与NC组比较有显著性差异(P值<0.05),蛋白表达抑制率为83.4%。MTT检测KD组较NC组细胞生长缓慢,但与NC组比较无统计学意义。克隆形成实验测得KD组联合放疗后比NC组联合放疗后细胞的平均致死剂量D0由1.843Gy降为1.297Gy,放射增敏比SER为1.421,提示有放疗增敏作用。流式细胞仪测得KD组联合放疗后细胞周期阻滞在G2/M期。  结论:沉默PDGFR-β的表达后,不能够抑制大鼠C6胶质瘤细胞的生长缓,但在体外具有放疗增敏作用,有关其放疗敏感性机制及体内实验有待进一步研究,PDGFR-β可作为胶质母细胞瘤治疗的靶点之一。
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