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在蜂王浆中发挥免疫调节功能的主要成分是蛋白质,特别是作为主要糖蛋白的蜂王浆主蛋白1（MRJP1）。MRJP1被认为是蜂王浆过敏的主导蛋白,对蜂王浆过敏的人可能患有急性哮喘、接触性皮炎、过敏反应,严重情况下会导致死亡。有研究发现,糖蛋白的许多生理功能是在糖链的共同参与下完成的,甚至糖链的作用更直接、更突出,并且影响糖蛋白的构象。为了进一步探讨糖链的作用,本研究在不切除糖链的情况下,利用天然MRJP1制备多克隆抗体具有重要意义。本论文的主要目的在于寻找有效的方法从多克隆抗体中纯化出特异性更强的抗体IgG,并建立计算机检索与人工手动检索相结合分析抗体一级结构的方法,初步表征多克隆抗体,为MRJP1多克隆抗体后续在体外诊断试剂和治疗疾病药物开发方面的应用研究提供基础数据。主要研究结果如下:（1）MRJP1的提取与兔多克隆抗体制备:对MRJPs进行超速离心,得到三层不同的溶液,UMRJPs中主要存在MRJP2和MRJP3;MMRJPs观察到MRJP1、MRJP2和MRJP3均存在;LMRJPs的电泳结果显示其主要为MRJP1,含量占比约为92.95%。利用分离得到的MRJP1进行新西兰大白兔免疫实验,得到效价达1:56000的血清。采用蛋白A亲和层析纯化血清后,在变性电泳图上显示出50 kDa的重链和25 kDa的轻链,在非变性条件下电泳图只显示一个条带,分子量在150 kDa左右,即成功获得MRJP1多克隆抗体IgG。（2）等电点聚焦电泳分离、筛选特异性最强的多克隆抗体组分:利用等电点聚焦电泳区分出10个不同的组分,然后利用电洗脱的方式洗脱得到这10个不同的组分,SDS-PAGE与Native-PAGE的结果表明电洗脱方法可以成功地从等电点胶中得到不同的多克隆抗体组分。采用了ELISA方法验证10个组分对于不同底物（MRJP1、MRJP2和MRJP3）的OD450值,结果发现组分5对于MRJP1的反应较强的同时对于MRJP2和MRJP3的反应较弱,故而认为组分5对于MRJP1的特异性更强。Western Blot实验也同样验证了ELISA方法的结果。后续将会选择组分5进行接下来的实验。（3）组分5的抗体一级结构表征:双酶酶解蛋白,利用LC-MS/MS的数据,建立以Peaks Studio软件搜库为辅,人工手动计算为主的分析方法。以此方法综合分析可得重链的序列:LSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLSSYAMGWVRQAPGEGLEYIGFIE SNRTTYYANWVD/N（+0.98）GRFTISG/K/S/QTSTTVDLKITSPTTED/N（+0.98）TATYFCA RGYKRAFDPWGP/EKFYGYDYWGQGTLVTVSSGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTL GCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVA HPATNTKVDKTVAPSTCSKPTCPGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEP VTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKT VAPSTCSKPTCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTW YINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPITHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTI SKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTT PAVLDSDGSYFLYNKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK,共542个氨基酸。轻链的序列为:ADL/NVVMTQTPASVSEPVGGTVTLKCQASQSLSSY/AAL AWYQQKPGQPPKLLIYA/S/GASTLASGVP/SSRFEGSGSGTE/Q（+0.98）FTLTLSDVQEC DAATYYCQAGYNSVDTNNV/NSVNTNNV/TWTNNNNGFGGGTEVVVKGDPVAPTVL IFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNL SSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC,共216个氨基酸。所得序列在Uniprot网站上未发现有一致的记录,属于新发现的序列。