骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤，起源于原始分化不良的细胞，即原始间充质细胞的成骨细胞类，故有时又称为成骨肉瘤。近年来由于化学疗法的迅速发展，骨肉瘤的治愈率不断上升，可达50％以上，但是仍有20～40％的病人死于转移。80％的病人在确诊的同时已有未被发现的转移灶。因此，在治疗骨肉瘤时，除手术切除肿瘤组织以外，化疗对预后至关重要，化疗的关键是肿瘤细胞对化疗药物的敏感程度，而多药耐药(MDR)是多种肿瘤化疗失败的主要原因。因此，深入研究骨肉瘤的多药耐药的机制非常重要。为此，我们采用ABC免疫组化法，检测了94例入骨肉瘤中P-pg、GST-π、Topo Ⅱ的表达，为临床制定个体化化疗方案，延长病人的无瘤存活期和生存率提供信息。原发性典型骨肉瘤病理学表现复杂多变。为加深对骨肉瘤的超微结构及其细胞种类的认识，本研究通过9例原发性骨肉瘤的电镜观察，以相应的光镜下的主要组织分化为依据，分析并讨论了原发性骨肉瘤细胞的种类及其超微结构基础，对骨肉瘤复杂多变的结构性作了初步探讨。以上研究主要结果如下： 1．P-gp阳性产物呈棕褐色或棕黄色细颗粒状，主要定位于肿瘤细胞膜，部分胞浆中亦可见阳性，阳性表达率为45.7％(43／94例)，其表达与年龄、性别、肿瘤大小，Price分级和Dahlin分型均无关(P＞0.05)，但与WHO新分型显著相关，骨内高分化型P-gp表达明显低于其它三种类型(P＜0.05)。 2．GST-π阳性棕黄色颗粒分布于胞浆，极少数伴胞核染色。阳性表达率为71.3％(67／94例)，阳性表达与年龄、性别、肿瘤大小，Price分级和Dahlin分型及WHO新分型均无关(P＞0.05)。 3．Topo Ⅱ阳性产物主要表达在胞核，部分胞浆中亦可见阳性产物。在94例检测中，阳性表达率为34.0%(32/94例)，阳性表达与年龄、性别、肿瘤大小，Price分级和D曲11n分型无关，但与WHO新分型有关，骨内高分型Topoll表达明显高于其它三型(P<0.05)。 4.P一即和GsT一”表达与预后显著相关(P<0 .05)，而Topoll表达与预后无明显相关性(P>O.05)。 5.在9例超微结构观察中均可见骨母细胞样细胞、软骨母细胞样细胞、纤维母细胞样细胞、多核巨细胞。在这四种细胞间，还可见到有过渡现象，但基本上它们均有一定的特征，比较容易鉴别。另外，在纤维母样细胞型可见到相邻细胞紧密连接。 6.圆细胞型骨肉瘤的超微结构改变为:细胞呈圆形，核有卜2个，异染色质结块、核仁突出、细胞器少、线粒体大小不一且不规则。特征性的改变为部分细胞胞浆内有包含体，其中可见有横纹的胶原及钙沉积。 7.各型骨肉瘤细胞间质中可见轻基磷灰石结晶，结晶密集区可见羽毛状改变。 通过以上研究获得以下主要结论: 1.骨肉瘤mdr一1基因产物P糖蛋白的高表达为临床上骨肉瘤的耐药性提供了直接的证据，可能是骨肉瘤化疗失败的根本原因之一，P一gP介导的多药耐药机制在骨肉瘤耐药中起着关键作用。逆转P一gP的“外排泵”作用，在逆转骨肉瘤耐药上将会有重要的应用价值。 2.GST一二高表达常出现于一些难治性肿瘤，GST一二水平可以反映某些肿瘤固有的耐药性。本研究94例骨肉瘤中67例有不同程度的GST一:表达，推测骨肉瘤是容易产生耐药性的一种恶性肿瘤，GST一:高表达在其化疗耐药中有重要意义。 3.DNA Topon作为许多抗癌药物的靶酶，其表达降低，将使大多数化疗药物(ToPofl抑制剂)丧失重要靶点，无法通过抑制Topon而发挥作用。本研究94例骨肉瘤中，阳性表达者犯例(34.0%)，提示骨肉瘤MDR的产生可能与Topon不表达有关。 4.P一gP、GST一”、ToPoll表达与骨肉瘤的年龄、性别、肿瘤大小、Price Vll分级、D如hi分型无关，ToPoll、P一gP表达与wHO新分型有关(P<0 .05)，GST一二与WHO新分型无关(P>0.05)。 5.P一gp、GST一二、Topoll等多因素联合作用是骨肉瘤多药耐药的主要作用机制;P一gP和GST一“可能成为评估骨肉瘤预后的有价值的指标。 6.在骨肉瘤中，骨母细胞样细胞、软骨母细胞样细胞、纤维母细胞样细胞及圆细胞之间超微结构各具特点，但无论哪种组织学亚型，都是多种细胞性的，说明这些细胞来源于同一祖先细胞，即多能性原始间叶细胞。在骨肉瘤中，最有意义的超微结构改变是轻基磷灰石结晶沉积，对骨肉瘤的鉴别诊断有重要意义。