目的：　　通过对万古霉素耐药肠球菌(vancomycini resistance Enterococcus,VRE)耐药机制、分子流行病学及vanA耐药基因所处转座子Tn1546分子结构的研究，了解我院VRE菌株流行特点，为临床抗感染治疗及有效控制VRE院内传播提供依据。　　研究认为母鸡肠球菌天然含有vanC1基因簇，通过组成型表达和诱导型表达对万古霉素呈现低水平耐药，但实验室分离出10株对万古霉素呈现敏感表型的母鸡肠球菌，通过体外万古霉素耐药诱导试验检测试验菌株对万古霉素耐药是否为诱导型表达，同时检测试验菌株中vanC1基因簇中各基因及各基因表达情况，在分子水平探讨母鸡肠球菌对万古霉素呈现敏感的原因，为临床抗感染治疗提供新思路。　　自一门诊病人血标本中分离出1株vanC1基因阳性且对万古霉素呈现敏感的屎肠球菌，而目前尚无从人类分离出vanC1基因阳性屎肠球菌的报道。通过检测此菌株vanC1基因簇中各基因及其表达情况、采用脉冲场凝胶电泳（Pulsed field gel electrophoresis，PFGE）及Southern杂交的方法检测屎肠球菌中vanC1基因定位，同时采用多位点序列分型对此菌株进行分型研究，以对试验菌株有更为详尽的认识。　　方法：　　1.2010年1月至2012年5月同济医院临床微生物室共分离678株肠球菌，以万古霉素最小抑菌浓度（E-test）大于等于32μg/ml为筛选标准，共筛选出22株VRE（排除同一患者同一部位重复分离的菌株），包括21株屎肠球菌，1株母鸡肠球菌。采用琼脂稀释法对22株万古霉素耐药肠球菌进行抗菌药物敏感性实验；根据药敏实验结果确定万古霉素耐药表型；PCR检测万古霉素耐药基因；对vanA基因阳性菌株检测Tn1546分子结构；多位点序列分型（multilocus sequence typing,MLST）分析万古霉素耐药屎肠球菌分子流行病学。　　2.对2009至2011年自患者无菌体液中分离出的10株母鸡肠球菌，纸片扩散法检测万古霉素药物敏感性为敏感，对此10株菌进行研究。采用万古霉素耐药肠球菌筛选实验鉴别万古霉素耐药母鸡肠球菌（vancomycin resistance E.gallinarum,VREg）和万古霉素敏感型母鸡肠球菌(vancomycin susceptible E.gallinarum,VSEg)；琼脂稀释法检测试验菌株对常用抗菌药物敏感性；万古霉素耐药诱导试验检测母鸡肠球菌可否为万古霉素诱导耐药；PCR方法检测试验菌株vanC1、vanXYc、vanTc及启动子区域基因；RT-PCR方法检测基因表达。　　3.TJ4031分离自2012年一门诊患者血标本。PCR方法检测试验菌株vanC1、vanXYc及vanTc基因，RT-PCR分析基因表达情况，采用PFGE及Southern杂交的方法对vanC1基因定位进行研究，同时采用MLST分析此株菌型别。　　结果：　　一、万古霉素耐药肠球菌耐药性及其流行病学　　1、22株VRE对氟喹诺酮类、氨基糖苷类、青霉素类等抗菌药物均呈100％耐药，未检出利奈唑胺耐药菌，21株屎肠球菌万古霉素耐药特征为vanA表型-vanA基因型，母鸡肠球菌耐药特征为vanA表型-vanA和vanC1基因共存型；　　2、22株VRE中所携带转座子Tn1546结构分为Ⅰ（8株）、Ⅱ（12株）、Ⅲ（1株）及Ⅳ型（1株）；21株屎肠球菌有三种MLST型别，其中19株菌为ST17型，另2株菌分别属于ST78和ST64型。　　二、万古霉素敏感母鸡肠球菌分子机制研究　　1、10株母鸡肠球菌通过万古霉素耐药筛选试验显示4株为万古霉素耐药母鸡肠球菌（VREg），6株为万古霉素敏感母鸡肠球菌（VSEg）；　　2、琼脂稀释法药敏结果显示VREg菌株对青霉素、氨苄西林及氟喹诺酮类药物敏感率均高于VSEg菌株；万古霉素耐药诱导试验显示6株VSEg菌株不能被诱导耐药；　　3、PCR检测vanC1、vanXYc、vanTc及启动子基因显示10株母鸡肠球菌vanC1和vanXYc基因均为阳性，4株VREg菌株vanTc和启动子基因阳性，6株VSEg菌株vanTc和启动子基因阴性；　　4、RT-PCR检测结果显示，6株VSEg菌株vanC1、vanXYc基因均未表达。　　三、vanC1基因阳性屎肠球菌分子机制研究　　TJ4031菌株vanC1基因簇中vanC1及vanXYc基因为阳性，但RT-PCR分析结果表明两基因并未表达，MLST检测此株菌为新的ST序列型即ST837型，Southern杂交分析结果显示此vanC1基因定位于染色体。　　结论：　　一、万古霉素耐药肠球菌耐药性及其流行病学　　1、VRE菌株对常见抗菌药物几乎均呈现耐药，可以用来选择治疗的抗生素非常有限，VRE菌株的传播也使抗感染治疗成为一个棘手的问题，因此一旦出现泛耐药的细菌临床微生物室、临床科室及医院感染控制部门应充分协作，采取有效措施控制耐药菌株的传播。　　2、研究显示我院VRE的流行主要由vanA耐药基因引起，转座子结构Tn1546存在变异，3种MLST型别均属于CC17克隆型，为院内感染主要流行株，临床应加强抗菌药物的合理使用以预防耐药菌株的传播。　　3、本研究检出一株高水平万古霉素耐药母鸡肠球菌，此菌同时含有vanA和vanC1基因，目前国内尚无高水平耐药母鸡肠球菌的报道，应将母鸡肠球菌列入常规检测之中，以更好监测万古霉素耐药肠球菌的流行状况。　　二、万古霉素敏感母鸡肠球菌分子机制研究　　1、研究结果表明试验菌株中4株VREg可诱导对万古霉素耐药，而6株VSEg则不可诱导耐药，表明6株VSEg对万古霉素不表达耐药，vanC1基因的在其菌体内并未产生预期的对万古霉素耐药的作用，提示对于此类菌株所致临床感染可尝试选择万古霉素进行治疗，但仍需进一步研究；　　2、本部分中VREg对常用抗生素敏感率高于VSEg，表明VREg所引起感染治疗药物选择范围可能比VSEg菌株更为宽广，但对于微生物所致感染的治疗仍需以临床微生物室药敏试验结果为基础来合理选择抗生素方能有效快速治疗；　　3、对试验菌株进行分子研究发现，与VREg不同，VSEg菌株中存在vanTc及启动子基因的缺失，推测其出现的原因可能为长期进化过程致vanC1基因簇转移，而基因整合至新的菌株时基因簇中部分基因如vanTc基因出现整合失败而丢失，进而出现在粪肠球菌中检出不完整vanC1基因簇的报道。　　三、vanC1基因阳性屎肠球菌分子机制研究　　此株vanC1阳性屎肠球菌，Southern杂交结果显示vanC1基因位于屎肠球菌染色体，其vanC1基因簇和6株VSEg一样属vanTc基因缺失型，同时对万古霉素也呈现敏感表型，显示vanC1基因簇已经出现了变异，基因并不稳定存在于某一种细菌，尽管目前此类基因在菌体内未表达，但仍有可能成为未来抗微生物感染治疗的一个难题，需加强监测以防其暴发流行。