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本实验以海生蓝隐藻(Chroomonas placoidea T13)为原材料,经培养、收集、破碎、硫酸铵沉淀、分子筛层析等方法分离纯化得到藻蓝蛋白(PC-645),并对其亚基构成、亚基差异、蛋白结晶形式等性质进行了研究。 在不加入任何去污剂的情况下,初步摸索了PC-645的结晶条件,并观察到蓝色的结晶,为今后空间结构分析奠定基础。 经过IEF和SDS-PAGE分离分析、二级质谱鉴定,证实了隐藻藻蓝蛋白PC-645中新的发光亚基—β2的存在,且该亚基与已知的β(我们称之为β1)亚基相比,等电点更低,分子量也更低(β1:等电点PI=6.0,分子量20.3kDa;β2:等电点PI=5.7,分子量18.5kDa)。且不同硫酸铵饱和度分级沉淀并纯化得到的PC-645,其β1亚基和β2亚基的比例也是有差异的,且β2亚基在疏水性低的沉淀物中比例更高,随着硫酸铵饱和度的升高,其沉淀中β2亚基的比例反而会降低,该亚基可能与PC-645的疏水性直接相关。 质谱分析结果显示β1和β2亚基酶解后的肽片段的质荷比不同,一级肽指纹图谱的差异证明两种β亚基的一级序列存在差异性。 液相系统采用分析型的安捷伦1100和半制备型的Waters600两种,色谱柱为反向C18的色谱柱,液相的洗脱采用10%乙腈(ACN)0.1%三氟乙酸(TFA)到100%ACN0.1% TFA的线性梯度洗脱,液相分析结果表明,β1和β2亚基在极性端和非极性端都有一些细微的差异,与质谱分析结果相互印证。