研究背景乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范围的严重公共卫生问题之一,也是引起慢性肝炎的最常见病毒之一,其造成了广泛的疾病谱,包括无症状的携带者,潜伏性肝炎、急性肝炎、慢性肝炎、爆发性肝炎,甚至肝硬化、原发性肝细胞癌。慢性乙型肝炎是我国最常见的传染病,据估计中国人群中大约有1.3-2.0亿人,即约10%-15%的人口为慢性HBV携带者,其中大约2300多万人为慢性活动性肝炎,而且每年慢性乙型肝炎患者中发生肝硬化和原发性肝癌者分别占2%和1%,对人群健康造成了巨大的威胁,给患者带来了很大的精神负担及经济负担。长期以来学者们对其进行了大量的研究和探索,取得了相应进展,对慢性乙型肝炎的发病机理、治疗和预防均有了较深刻的理解,但是对其详细发病机理仍然有争议。HBV感染造成广泛的疾病谱,以及不同的疾病过程和临床结果,其原因与这些方面的因素有关：环境因素,如暴露人群的整体卫生状况、疫苗接种状况等；病毒因素,包括病毒载量、病毒基因型、以及病毒本身变异等；宿主因素,即感染者的年龄,性别,是否合并HCV、HDV、HIV等其他病毒感染,以及宿主的遗传易感性等多个方面。近年来,宿主的遗传易感性受到越来越多的研究者关注。在人类遗传因素中,主要有以下因素参与HBV感染过程：介导病毒进入肝细胞过程的基因,包括参与病毒与靶细胞膜吸附、融合和运输的基因；调节或控制对HBV感染免疫应答的基因；参与慢性HBV感染导致的肝硬化和肝细胞癌发生的基因,包括HBV的母婴传播；参与肝组织病理改变的基因；与抗病毒治疗抵抗或易感有关的基因等。大多数与HBV感染有关的人类基因的报道目前主要集中在人类白细胞抗原(HLA)、干扰素(INF)、肿瘤坏死因子TNF(TNF)、白细胞介素(IL)等基因。在以往病毒学和免疫学研究的基础上,一些研究者着手从乙肝病毒感染遗传易感性方面开展研究,大量疾病的相关基因不断被发现和遗传易感性机制被阐明,国内外对乙型病毒性肝炎宿主遗传易感性的研究成果也不断被报道。其中与HBV感染有关的候选基因主要有HLA-Ⅱ类的HLA-DQ和HLA-DR、TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-18、IL-1、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)KIR2DS、雌激素受体(ER)α、甘露糖结合蛋白(MBP)、维生素D受体(VDR)等。HBV并不直接损伤肝细胞,而是通过免疫应答在清除病毒时导致感染肝细胞的损伤。近年来发现人类载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3(APOBEC3)是一类介导天然免疫的新型宿主细胞因子,在机体抵御病毒感染的过程中发挥独特抗病毒功能。它通过使逆转录病毒合成的单链RNA发生C-U突变等机制,导致新合成的DNA降解或产生致死性的大量G-A突变,形成一种对抗病毒感染的天然免疫屏障。研究已发现人群中APOBEC3G存在微小变异,对不同人群中HIV感染过程和AIDS疾病进程发挥了不同影响。虽然与HIV不一样,HBV作为DNA病毒,在复制过程中不以DNA为模板,而是将DNA转录RNA中间体,再逆转录成DNA进行复制,与逆转录病毒的复制过程类似。而有研究也证实了APOBEC3G基因中rs8177832位点的多态性与HBV的复制有关。APOBEC3F与APOBEC3G蛋白序列相似,同样也具有相似的功能,本实验拟探讨APOBEC3F基因在人群中的多态性,分析其与HBV感染易感性的关系,选择扩增尚无中国人群多态性分布资料,片段适中易扩增的第4外显子区进行分析。研究方法采用病例对照研究方法。病例组选自2011年-2012年在南方医院肝病中心确诊的慢性HBV感染者179例,其中男119(64.2%)例,女60(35.8%)例,平均年龄(31.60±9.487)岁,根据HBV血清学标志物(HBV-M)分为HBeAg阳性慢性乙肝组和HBeAg阴性慢性乙肝组,其中HBeAg阳性组96(53.6%)例,HBeAg阴性组83(46.4%)例。对照组为南方医院肝病中心无近亲血缘关系的汉族非乙肝患者224例,其中男123(56.3%)例,女101(43.7%)例,平均年龄(32.64±13.829)岁。收集每一例受检者(包括病例组和对照组)基本情况及临床资料,无菌条件下EDTA抗凝采血管收集每一例受检者的静脉全血样本。取抗凝血200μL,用全血DNA提取试剂盒(康为世纪)进行全血DNA提取,提取的DNA保存于-20℃备用。自行设计引物,PCR扩增APOBEC3F第四外显子基因片段,测序并检测其基因多态性。PCR产物送往北京六合华大基因科技股份有限公司进行测序。纯化、测序过程均由该公司完成。统计学处理用Mann-Whitney U-t检验比较病例组与对照组之间年龄分布的差异,以χ2检验验证基因型频率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。多态性与HBV感染风险之间的相关性用χ2检验,以比值比(OR值)及其95%置信区间(confidence intervals, CI)表示,所有的统计检验均为双侧概率检验,a<0.05,统计学分析使用SPSS16.0软件。结果1、用Mann-Whitney U-t检验比较病例组与对照组之间年龄分布,差异无统计学意义(t=-0.858,P=0.391)；用χ2检验比较病例组与对照组之间性别分布,差异无统计学意义(χ2.646,P=0.104)；两组均衡可比。2、PCR产物经Sanger测序结果显示-498位点、-532位点、-552位点在检测的403例样本中没有多态性存在。3、在179例HBV感染者中,等位基因T、C的频率分别为264(71.7%)、94(28.3%)；在对照组中224例个体等位基因T、C的频率分别为410(91.5%)、38(8.5%)。两组等位基因频率分布(χ2=45.906, OR=0.260,95%CI(0.173,0.391), P=0.000<0.05)差异有统计学意义。4、将年龄、性别进行分层分析,结果显示各年龄组间和男女各组之间差异均无统计学意义。5、HBeAg阳性慢性乙肝组与HBeAg阴性慢性乙肝组之间的基因型频率分布差异无统计学意义(χ2=0.001,P=0.979),提示-536等位基因频率的分布与HBeAg是否阳性无关；HBeAg阳性慢性乙肝组和对照组之间的基因型频率分布差异有统计学意义(χ2=22.695, P=0.000), HBeAg阳性慢性乙肝组中C基因高于对照组；HBeAg阴性慢性乙肝组和对照组之间的基因型频率分布差异有统计学意义(χ2=35.685,P=0.000), HBeAg阴性慢性乙肝组中C基因也高于对照组。结论1、APOBEC3F基因第4外显子-536位点T-C突变与HBV感染易感性有关,携带C可能使HBV感染的风险增加。2、APOBEC3F基因第4外显子-536位点基因频率在HBeAg阴性慢性乙肝组的分布与HBeAg阳性慢性乙肝组一致,提示-536位点T-C突变的HBV感染后慢性化进展无关。3、中国南方汉族人群中APOBEC3F基因第4外显子-498位点、-532位点、-552位点与现有其他地区研究中的基因频率分布一致。