第一部分：MiR-182对瘦素诱导的卵巢癌细胞生长的影响及机制研究　　研究背景：　　卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，严重威胁妇女健康，死亡率居妇科肿瘤之首。早期诊断困难及复发转移导致治疗手段缺乏，是卵巢癌高死亡率的主要原因。因此及早捕捉预警信号并阐明卵巢癌发生发展的相关分子机制，对卵巢癌的防治至关重要，但目前相关机制尚未阐明。流行病学数据表明肥胖增加激素依赖性肿瘤（如卵巢癌）的发生风险，瘦素(Leptin)作为重要的脂肪因子类激素之一，参与调控机体的脂肪代谢，并与多种肿瘤的发生有关。研究发现卵巢癌时瘦素水平升高，且与患者无病生存期密切相关，但目前瘦素与卵巢癌增殖、凋亡的关系及其在卵巢癌起源中的作用尚不明确。　　MicroRNA(miRNA)是一类非编码小RNA，可在转录后水平通过抑制翻译或者诱导降解抑制靶mRNA的功能，调节细胞分化、增殖和凋亡过程。研究表明多种肿瘤组织存在miRNAs的异常表达或者突变，并影响肿瘤的生长、侵袭和转移。MiR-182是重要的miRNAs分子，其过表达于输卵管内上皮性浆液性卵巢癌和高级别浆液性卵巢癌，并促进良性和恶性肿瘤细胞的侵袭和转化，提示miR-182在卵巢癌的早期发生中具有重要意义，而对其进行有效调节将有助于卵巢癌的防治。研究表明瘦素可通过影响miRNAs的表达调节骨骼肌细胞的生长，但关于卵巢癌发生和发展过程中瘦素影响miRNAs表达及机制未见报道。　　综上所述，基于相关领域国内外的研究进展，本课题体外研究了瘦素通路下游信号分子STAT5介导的miR-182上调对卵巢癌细胞生长和转化的影响及机制。本研究肯定了瘦素和miR-182在卵巢癌中的作用，进一步阐明了卵巢癌发生发展的机制，为卵巢癌的早期诊断和治疗提供新的线索。　　研究目的：　　1.瘦素对卵巢癌细胞生长、增殖及转化的作用。　　2.探索介导瘦素调节卵巢癌细胞生长、增殖及转化的miRNAs及miR-182和miR-96在瘦素作用中的影响。　　3.观察瘦素下游信号通路对miR-182和miR-96的作用。　　研究方法　　1.卵巢癌细胞系瘦素及瘦素受体的表达　　卵巢癌细胞(SKOV3和A2780)37℃培养24小时，RT-PCR检测瘦素和瘦素长型受体OB-Rb和短型受体OB-Ra表达，Westernblot检测瘦素及其受体的蛋白水平。培养72小时后收集上清，ELISA法检测内源性瘦素表达。　　2.瘦素对卵巢癌细胞增殖、凋亡和转化的影响　　分别给予SKOV3和A2780细胞不同剂量瘦素（0、10、50、100和500ng/mL），每隔24小时收集细胞，WST-1法检测细胞增殖并绘制生长曲线。卵巢癌细胞SKOV3和A2780分为Control、Leptin、Anti-leptin、Leptin+Anti-leptin组，在0.3％的软琼脂中37℃培养3周后，结晶紫染色观察不同组别软琼脂中形成的单细胞克隆数目。卵巢癌细胞分为Control、Leptin、Anti-leptin、Leptin+Anti-leptin组37℃培养48小时后，流式细胞术检测各组细胞的凋亡率，瘦素处理的结肠癌细胞-HCT-116用于阳性对照。　　3.瘦素作用后卵巢癌细胞转录因子FOXO3表达的变化，并观察其在瘦素调节卵巢癌细胞增殖中的作用　　卵巢癌细胞（SKOV3和A2780）分为Control、Leptin、Anti-leptin、Leptin+Anti-leptin组，37℃培养48小时后，Westernblot检测FOXO1和FOXO3蛋白水平变化，筛选表达变化的FOXO分子，然后WesternBlot检测其下游靶分子蛋白水平表达。　　siRNA干扰相应FOXO分子的表达，RT-PCR和WesternBlot分别从基因水平和蛋白水平检测干扰效率，卵巢癌细胞分为Control、Leptin、Con-siRNA和FOXO-siRNA组，37℃培养48小时后，WST-1检测各组细胞的增殖变化。　　4.瘦素对靶向作用于FOXO分子3-UTR的miRNAs的影响，miRNAs在卵巢癌细胞增殖中的作用　　PCR克隆扩增FOXO分子的3-UTR并构建psiCHECK2荧光载体，用该载体及对照空载体分别转染卵巢癌细胞SKOV3和A2780。37℃培养24小时后，细胞分为Vector、Vector+Leptin、FOXO-3-UTR、FOXO-3-UTR+Leptin组并继续培养48小时，双荧光报告系统检测不同组别的荧光信号强度。　　卵巢癌细胞SKOV3和A2780分为Control和Leptin组，培养48小时后，RT-PCR检测miRNAs分子的基因水平表达变化。用所测miRNAs的mimics转染卵巢癌细胞，37℃培养48小时，RT-PCR检测各组过表达效率，Westernblot检测不同mimics转染细胞的FOXO分子蛋白水平的变化，WST-1检测细胞的增殖变化。用miRNAs抑制剂转染卵巢癌细胞，37℃培养24小时后RT-PCR检测各组抑制效率，细胞分为Control、Leptin、Leptin+miRNAsinhibitor并继续培养48小时，Westernblot检测卵巢癌细胞的FOXO分子蛋白水平的变化，WST-1检测细胞的增殖变化。　　5.瘦素受体下游信号传导分子STAT3、STAT5在瘦素调节的miRNAs表达上调中的作用　　瘦素作用卵巢癌SKOV3和A2780细胞48小时后，Westernblot检测瘦素长型受体OB-Rb表达水平的变化。　　瘦素处理卵巢癌SKOV3和A2780细胞不同时间（0，15，30，60分钟）后，Westernblot检测不同STAT信号通路蛋白(STAT3、STAT5)的表达变化。　　卵巢癌SKOV3和A278048细胞分为Control、Leptin、STAT5-siRNA、CucurbitacinⅠ(p-STAT3抑制剂)、Leptin+STAT5-siRNA、Leptin+CucurbitacinⅠ组，RT-PCR检测目的miRNAs分子基因表达水平变化。　　研究结果：　　1.卵巢癌细胞表达瘦素受体　　实验表明，卵巢癌SKOV3和A2780细胞在蛋白水平和mRNA水平均可检测到瘦素、瘦素长型受体OB-Rb和短型受体OB-Ra的表达，两种细胞培养上清中也存在极低量的瘦素（分别为38.39±3.72pg/mL和35.40±2.44pg/mL），因远低于生理剂量，后续实验均给予外源性瘦素。　　2.瘦素促进卵巢癌细胞的增殖和转化能力　　瘦素以剂量依赖和时间依赖方式促进卵巢癌细胞SKOV3和A2780的增殖能力（P＜0.05）。同时增加软琼脂中两种卵巢癌细胞克隆的数目和大小（SKOV3细胞:2.72±0.34倍，P＜0.05;A2780细胞:1.97±0.15倍，P＜0.05），瘦素抗体可阻断瘦素的促细胞转化能力。流式细胞术显示瘦素不影响卵巢癌细胞SKOV3和A2780的凋亡率（P＞0.05），但显著抑制结肠癌细胞HCT-116的凋亡(P=0.0169)。　　3.瘦素抑制卵巢癌细胞FOXO3的表达，从而促进细胞增殖　　Westernblot结果表明瘦素（100ng/ml）显著抑制卵巢癌细胞SKOV3和A2780内FOXO3的表达(SKOV3细胞:55.1±1.8％，P＜0.01;A2780细胞:48.4±10.1％，P＜0.01)，FOXO1的表达无显著变化(P＞0.05)。进一步检测发现瘦素(100ng/ml)显著抑制细胞内FOXO3的两个下游靶基因Bim（SKOV3细胞:45.8±1.5％，P＜0.01;A2780细胞:46.7±3.6％，P＜0.01）和p27（SKOV3细胞:41.4±6.3％，P＜0.01;A2780细胞:36.7±9.0％，P＜0.01）的表达。利用FOXO3-siRNA干扰掉细胞内FOXO3基因和蛋白表达后，发现两种细胞的增殖能力均显著增强（SKOV3细胞:1.63±0.10倍，P＜0.01;A2780细胞:1.59±0.16倍，P＜0.05）。　　4.瘦素通过上调靶向作用于FOXO33端非翻译区(3-UTR)的miRNAs抑制FOXO3表达，从而促进卵巢癌细胞增殖　　利用包含FOXO33-UTR的psiCHECK2荧光载体转染细胞后，双荧光报告系统显示瘦素(100ng/ml)显著降低卵巢癌细胞SKOV3和A2780内的荧光素酶强度（SKOV3细胞:53.4±2.5％，P=0.001;A2780细胞:41.6±8.5％，P=0.016）。RT-PCR结果显示瘦素(100ng/ml)显著上调SKOV3细胞中靶向作用于FOXO3的肿瘤相关miRNAs，包括miR-182（2.26±0.23倍，P＜0.01）、miR-106（1.52±0.16倍，P=0.03）、miR-96（1.91±0.03倍，P＜0.01）和miR-155（1.53±0.10倍，P=0.01），对A2780细胞中的上述miRNAs具有相似的作用。但两种细胞miR-93和miR-153的表达均不受瘦素影响（P＞0.05）。　　上述六种miRNAs的mimics分别转染卵巢癌细胞SKOV3和A2780，Westernblot显示miR-182(SKOV3细胞:64.8％±11.4％，P＜0.05;A2780细胞:51.8％±0.5％，P＜0.05)和miR-96(SKOV3细胞:58.3％±2.5％，P＜0.05;A2780细胞:42.2％±4.1％，P＜0.05)两种mimics可以有效抑制两种细胞内FOXO3的表达，miR-155和miR-106a的mimics则不具备此功能(P＞0.05)。利用抑制剂干扰阻断两种细胞内miR-182和miR-96的表达后，Leptin对FOXO3表达的抑制作用亦消失。WST-1检测两种细胞的增殖发现，miR-182（SKOV3细胞:2.65±0.05倍，P＜0.01;A2780细胞:2.52±0.06倍，P＜0.01）和miR-96（SKOV3细胞:2.03±0.08倍，P＜0.01;A2780细胞:1.85±0.13倍，P＜0.05）的mimics可促进两种细胞的增殖，而miR-182（SKOV3细胞:37.1％±3.3％，P＜0.01;A2780细胞:37.4％±5.0％，P＜0.01）和miR-96(SKOV3细胞:28.9％±6.2％，P＜0.01;A2780细胞:29.9％±3.5％，P＜0.01)抑制剂则可有效抑制瘦素对两种细胞的促增殖效应。　　5.瘦素通过STAT5通路上调细胞中miR-182和miR-96的表达　　瘦素（100ng/ml）能够促进卵巢癌细胞SKOV3和A2780瘦素长型受体OB-Rb的表达。同时瘦素可活化瘦素受体下游信号通路STAT3和STAT5，分别在60、30分钟活化达到高峰，特异性阻断两个通路发现cucurbitacinⅠ（STAT3抑制剂）不影响瘦素诱导的miR-182和miR-96表达上调(P＞0.05)，而STAT5-siRNA能够降低瘦素导致的miR-182(SKOV3细胞:43.5％±2.5％，P＜0.01;A2780细胞:32.0％±9.4％，P＜0.01)和miR-96(SKOV3细胞:34.1％±0.8％，P＜0.01;A2780细胞:22.7％±4.2％，P＜0.05)表达上调，表明STAT5通路参与miR-182和miR-96依赖的FOXO3抑制和细胞增殖。　　结论：　　1.MiR-182和miR-96在瘦素抑制FOXO3表达、进而促进抑卵巢癌细胞增殖这一过程中发挥重要的介导作用。　　2.瘦素通过下游STAT5信号途径上调卵巢癌细胞miR-182和miR-96的表达。　　第二部分：抗miR-182化合物对卵巢癌体内生长和转移的影响及机制研究　　研究背景：　　卵巢癌是女性死亡率最高的生殖系统肿瘤，高级别浆液性卵巢癌是卵巢癌中侵袭程度最高的类型，多数患者确诊时已属晚期，肿瘤已出现广泛转移。现有的手术治疗和化疗可在一定程度上减少肿瘤负荷，但对患者远期生存率并无显著影响。近年来抗microRNA治疗(anti-microRNA)成为癌症治疗的一种潜在有效的途径。miRNAs为一种小分子非编码RNA，某些miRNAs与肿瘤的生长、侵袭和远处转移密切相关。其中miR-182是一种原癌miRNAs，可负性调节多种与肿瘤生长、侵袭、转移调节有关的抑癌基因，从而促进多种肿瘤的发生发展。　　研究表明miR-182过表达与高级别浆液性卵巢癌，与肿瘤的生长及侵袭密切相关，且与患者的不良预后有关。本课题组前期发现miR-182在瘦素介导的促卵巢癌细胞增殖和转化过程中发挥关键作用，因此在miR-182过表达的卵巢癌中，anti-miR-182治疗可能会减少肿瘤负荷、抑制侵袭转移。综上所述，基于本课题国内外的研究进展及课题组的前期工作基础，本课题组首次尝试应用anti-miR-182进行卵巢癌治疗。我们将人卵巢癌细胞固定植入小鼠卵巢包膜内，成功构建了小鼠原位卵巢癌模型，并给予小鼠anti-miR-182系统治疗，应用在体生物光学成像技术动态监测肿瘤的生长转移，治疗结束后用组织病理学手段确认了肿瘤在小鼠各脏器的侵袭转移情况及药物的作用，并进一步对肿瘤组织中miR-182靶基因的表达情况进行了分子生物学分析。本研究为侵袭性高级别浆液性卵巢癌提供了一种潜在的新的治疗手段。　　研究目的：　　1.模拟人卵巢癌构建小鼠原位卵巢癌模型。　　2.给与小鼠anti-miR-182治疗，动态观察药物对肿瘤生长和侵袭的影响。　　3.组织学观察药物对肿瘤生长和侵袭转移的作用。　　4.分析anti-miR-182影响肿瘤侵袭转移的分子机制。　　研究方法：　　1.体外检测anti-miR-182对卵巢癌细胞的影响　　体外实验利用人卵巢癌细胞系OVCAR3、HEY和SKOV3细胞，应用慢病毒包装转染系统构建miR-182稳定过表达的HEY和SKOV3细胞系。利用脂质体转染技术将anti-miR-182瞬时导入上述卵巢癌细胞系，细胞分为Control、anti-miR-182组，37℃培养48小时后RT-PCR检测细胞内miR-182的基因水平，Westernblot检测miR-182靶基因的蛋白水平。　　将anti-miR-182利用脂质体转入卵巢癌细胞OVCAR3、HEY和SKOV3，37℃培养24小时后，1）Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞侵袭能力的变化;2）将Control细胞和anti-miR-182分别种在5个96孔板上（2×103每孔，每种细胞每板5个复孔），利用WST-1连续五天每天检测细胞的增殖并绘制生长曲线;3）软琼脂克隆形成实验检测卵巢癌细胞非停泊性生长能力的变化。　　2.构建裸鼠原位人卵巢癌模型　　利用慢病毒包装转染系统将荧光素酶基因导入稳定过表达miR-182的SKOV3卵巢癌细胞(SKOV3-miR-182-1uc)，该荧光素酶与底物作用后可被在体生物光学成像系统检测(IVIS)。　　SKOV3-miR-182-1uc消化计数后，利用Ⅳ型胶原将肿瘤细胞（106个细胞）固定成直径约0.2厘米的球状小团，显微镜下手术将细胞团块植入8周龄裸鼠左侧卵巢包膜内。　　3.Anti-miR-182治疗　　术后小鼠随机分成对照组（20只）和anti-miR-182实验组（20只），并于术后第三天分别腹腔注射安慰剂或anti-miR-182(25mg/kg)，每周两次，整个治疗周期为8周（其中实验组4只动物仅治疗1周）。　　4.Anti-miR-182对卵巢原发肿瘤生长的影响　　治疗期间每周一次应用IVIS技术动态监测对照组和实验组肿瘤的生长和侵袭，利用软件定量分析两组动物肿瘤信号强度。　　8周后处死小鼠，测量对照组和实验组肿瘤实际长短径线，收集冰冻所有小鼠血清和部分肿瘤、肝脏组织，切除小鼠所有器官（肝、肾、脾、胰腺、肠道组织、子宫输卵管、卵巢肿瘤及对侧卵巢、肺、心脏）并固定备用。　　ELISA检测对照组和实验组血清中CA125的水平。提取对照组和实验组肿瘤组织总RNA，RT-PCR检测两组肿瘤组织内与细胞周期调节或细胞死亡有关(CDKN1A、CDKN1B、FOXO1、CHEK2)的基因表达水平。　　5.Anti-miR-182对卵巢肿瘤侵袭远处转移的影响　　IVIS技术动态监测对照组和实验组原发瘤的转移信号。对两组动物所有器官进行组织切片和HE染色，显微镜下观察个脏器转移瘤的情况并进行统计分析。　　6.肿瘤组织的分子生物学水平分析　　提取对照组和实验组动物肿瘤及血清中的总RNA，RT和实时定量PCR检测肿瘤即血清中miR-182及其同一基因簇miR-183和miR-96的基因表达。提取两组动物肿瘤组织内的总蛋白，Westernblot检测两组肿瘤组织内miR-182靶基因(BRCA1、MTSS1、FOXO3)和诱导基因HMGA2的蛋白水平变化。　　7.Anti-miR-182治疗对肿瘤微环境的影响　　对对照组和实验组肿瘤组织切片和HE染色，镜下观察肿瘤与卵巢、输卵管和卵巢周围脂肪组织的关系，免疫组织化学染色确定肿瘤周围微环境中的细胞成分。炎症基因芯片技术观察两组肿瘤组织内炎症基因谱的变化。RT-PCR检测对照组和实验组（各8例）肿瘤内趋化因子和细胞因子（CCL2、IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ）的基因水平变化。　　人卵巢癌细胞系SKOV3分为Control组、anti-miR-182组、miR-182过表达组、miR-182过表达+anti-miR-182组，37℃培养48小时后RT-PCR检测细胞内CCL2基因水平的变化。　　8.药物毒性分析　　8周治疗结束后，收集对照组和anti-miR-182实验动物的全部器官（肝脏、胰腺、胃肠道、肾、脾及子宫）并进行组织切片和HE染色，镜下观察两组组织内细胞的形态学变化，判断药物的毒性作用。　　研究结果：　　1.Anti-miR-182抑制体外卵巢癌细胞的增殖、基质胶侵袭和转化能力　　RT-PCR结果显示anti-miR-182显著抑制OVCAR3、HEY-miR-182和SKOV3-miR-182细胞内miR-182的基因水平(P＜0.001)。Westernblot结果显示，anti-miR-182显著上调SKOV3-miR-182细胞内miR-182靶基因FOXO3（1.47±0.18倍，P＜0.05）、BRCA1（3.09±0.99倍，P＜0.05）、和MTSS1（1.39±0.18倍，P＜0.05）的蛋白水平，同时下调miR-182诱导的HMGA2（62.6％±17.2％，P＜0.01）的蛋白表达，对OVCAR3和HEY-miR-182细胞具有相似效应。　　基质胶侵袭实验结果显示anti-miR-182可显著抑制SKOV3-miR-182细胞的侵袭能力（抑制率57.1％±7.9％，P＜0.001）。软琼脂克隆形成实验表明anti-miR-182可显著减少单细胞克隆形成数目和大小（抑制率54.8％±16.3％，P＜0.01）。WST-1细胞增殖实验结果显示anti-miR-182抑制SKOV3-miR-182细胞的体外增殖（第3天，P＜0.05;第四天P＜0.05;第五天P＜0.01）。　　2.构建裸鼠原位人卵巢癌模型　　将SKOV3-miR-182-1uc细胞包埋入Ⅳ型胶原并植入裸鼠左侧卵巢包膜内，术后第二天，IVIS检测结果表明所有小鼠荧光信号相同(相对荧光强度3-3.5×109)，表明卵巢癌细胞植入量在所有动物体内基本一致，无腹腔泄漏。　　3.Anti-miR-182治疗抑制卵巢癌肿瘤的体内生长　　术后第3天，小鼠被随机分为对照组和anti-miR-182实验组并分别给予安慰剂或anti-miR-182腹腔注射治疗，治疗剂量25mg/kg，一周两次，整个疗程为8周。IVIS图像显示从治疗第5周开始，实验组与对照组肿瘤大小之间开始出现差异（对照组信号强度为（17.73±7.72）×109，实验组信号强度为（5.20±6.63）×109，P＜0.01），且该差异随着治疗时间延长而增大。　　处死小鼠测量两组小鼠卵巢肿瘤实际大小发现表明anti-miR-182治疗组的肿瘤(5.42±1.00mm，90.59±37.31mm3)显著小于对照组(8.07±1.74mm，310.89±187.12mm3)，其最长径线较对照组减少38％，体积较对照组减少70.9％(P＜0.01)。ELISA结果显示对照组小鼠血清CA125水平高于实验组小鼠(P=0.06)。　　RT-实时定量PCR结果显示，anti-miR-182显著上调肿瘤组织内与细胞生长和死亡有关的miR-182假定靶基因CDKN1A(P=0.0199)、CDKN1B（P=0.0156）、FOXO1(P＜0.0001)、CHEK2(P＜0.0001)。　　4.Anti-miR-182治疗抑制小鼠体内卵巢癌细胞的侵袭和远处转移　　治疗第8周IVIS图像显示，对照组肿瘤的远处转移率为28％(5/8)，实验组的转移率为7％(1/15)。组织学分析结果显示对照组77.8％(14/18)的动物存在至少一处转移癌灶，实验组33.3％(5/15)的动物存在至少一处转移灶;对照组共发现31个转移瘤，实验组仅发现6个转移瘤。对照组和实验组肿瘤远处转移率具有显著的统计学意义（P＜0.05）。转移瘤数目由多到少的部位是依次是脾脏（对照组阳性率为44％，8/18;实验组阳性率为20％，3/15）、大网膜(对照组阳性率为28％，5/18;实验组阳性率为13％，2/15)、胰腺（对照组阳性率为22％，4/18;实验组阳性率为0％）、和肝脏（对照组阳性率为11％，2/18;实验组阳性率为0％）。与其他部位的转移瘤相比，胰腺转移瘤更大、侵袭性更强。对照组有一只小鼠发生了对侧卵巢转移。虽然肾实质内未发现转移瘤，对照组50％(9/18)的动物的卵巢肿瘤与同侧发生肾粘连，而anti-miR-182治疗组动物未发现此现象(0/15)。对照组和实验组动物均未发现肺转移灶。　　5.Anti-miR-182治疗后肿瘤组织的分子生物学分析　　实时定量PCR结果显示与对照组肿瘤相比，anti-miR-182治疗组的肿瘤组织内miR-182表达水平极低（降低94.9％±13.3％）或低于测量范围(P＜0.001)，同时显著降低miR-183的表达（降低92.5％±9.7％，P＜0.001），但对miR-96的表达无影响（P＞0.05）。小鼠血清内miR-182（降低53.2％±10.4％，P＜0.01）和miR-183（降低84.3％±20.6％，P＜0.01）的水平也显著降低。　　Westernblot结果显示经anti-miR-182治疗后肿瘤内miR-182的靶基因BRCA1（2.63±0.35倍，P＜0.01）、FOXO3（1.42±0.18倍，P＜0.01）和MTSS1（2.63±1.29倍，P＜0.01）与对照组相比显著上调，而miR-182诱导的基因HMGA2表达下调（降低71.5％±4.0％，P＜0.01）。　　6.Anti-miR-182治疗诱导的炎症反应抑制肿瘤的侵袭　　组织学观察发现anti-miR-182治疗组73.3％(11/15)的小鼠肿瘤细胞植入部位（卵巢旁软组织）有大量单核细胞浸润，对照组虽有16.7％(3/18)的动物存在单核细胞浸润，但单核细胞数量明显少于实验组。免疫组织化学染色证实了浸润细胞为KP1阳性小鼠单核细胞。单核细胞浸润少的肿瘤表现出浸润生长模式，并穿透卵巢包膜侵入周围脂肪组织，而周围有大量单核细胞浸润的肿瘤则局限于卵巢包膜内。　　炎症基因谱分析显示对照组肿瘤与anti-miR-182治疗组肿瘤组织炎症基因谱发生改变。实时定量PCR结果表明与对照组相比，实验组肿瘤组织内CCL2(P＜0.0001)、IL-6(P=0.0019)、IL-8(P=0.0002)、TNF-α(P=0.0088)、IFN-γ（P＜0.0001）的表达显著上调。体外实验表明，无论在初始SKOV3细胞还是SKOV3-miR-182细胞，anti-miR-182均可显著上调细胞内CCL2的基因表达（SKOV3细胞:3.60±0.73倍，P＜0.001;SKOV3-miR-182细胞:11.39±0.21倍，P＜0.001）。　　7.Anti-miR-182治疗对小鼠无明显不良组织毒性作用　　组织病理学观察发现经8周anti-miR-182治疗后，小鼠的肝脏、胰腺、胃肠道、肾、脾及子宫均无显著的组织学和细胞学变化。　　结论：　　1.建立的裸鼠原位卵巢癌模型可成功模拟人原发性卵巢癌的生长和侵袭模式，适用于卵巢癌的体内研究。　　2.Anti-miR-182体内、体外均可通过下调miR-182、恢复其靶分子的表达有效抑制人卵巢癌细胞的增殖、侵袭和远处转移;同时anti-miR-182可诱导肿瘤局部炎症反应抑制肿瘤侵袭转移。　　3.Anti-miR-182体内应用无不良组织学毒性作用。