【摘 要】
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目的:构建能同时检测鸟、海、偶然、堪萨斯及溃疡分枝杆菌等五种感染手部常见NTM的多重PCR方法,为手部NTM感染的早期诊疗提供实验方法。方法:根据前期研究成果,1.通过GeneBan
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目的:构建能同时检测鸟、海、偶然、堪萨斯及溃疡分枝杆菌等五种感染手部常见NTM的多重PCR方法,为手部NTM感染的早期诊疗提供实验方法。方法:根据前期研究成果,1.通过GeneBank数据库和文献查找鸟、海、偶然、堪萨斯及溃疡分枝杆菌等五种感染手部常见NTM的特有基因序列,用MFEprimer-5.0及Olige6.0软件设计引物,并用DNAMAN软件对其进行评估,筛选出特异性较高的引物构建PCR。2.单一PCR扩增标准菌DNA后进行测序,以验证本研究所用的标准菌是否符合要求。3.利用其引物间无互补或互补性较小的特点,构建能同时检测上述五种NTM的多重PCR,通过优化多重PCR的退火温度,评估其特异性及敏感性。4.用该多重PCR检测并鉴定12份临床考虑手部NTM感染的标本。结果:1.成功为上述五种分枝杆菌设计了5对特异性引物;2.单一PCR检测本研究所用的标准菌符合要求;3.成功构建了能同步检测鸟、海、偶然、堪萨斯及溃疡分枝杆菌五种常见手部NTM感染的五重PCR方法;4.该五重PCR的最佳退火温度为57.5℃,具有较高的特异性及敏感性;5.该五重PCR检测12份临床标本,10份标本扩增出阳性条带,检出率为83%;6、利用该五重PCR检测NTM可将时间缩短至4小时左右。结论:本研究建立的m PCR可同步检测鸟、海、偶然、堪萨斯及溃疡分枝杆菌等五种手部常见的NTM感染,具有较高的特异性及敏感性。该方法可迅速将NTM鉴定至种属及亚种水平,为临床鉴定NTM感染并制定最佳诊疗方案提供新的检验方法。
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