论文部分内容阅读
目的马勃多糖是马勃重要的活性成分之一,具有抑菌、保护肝损伤、抑制肿瘤细胞生长、抗氧化等作用。本课题选取了脱皮马勃(Lasiosphaera fenzlii Reich.)和多根硬皮马勃[Scleroderma polyrhizum(J.F.Gmel.)Pers.]作为研究对象。分别对脱皮马勃子实体中粗多糖的(soluble polysaccharides from Lasiosphaera fenzlii Reich.,RLSP)超声波提取工艺和多根硬皮马勃液体发酵工艺进行优化,并对多根硬皮马勃粗多糖(polysaccharide-s from Scleroderma polyrhizum(J.F.Gmel.)Pers.,PSP)的体外抑菌活性进行了研究。同时,还对中药提取液加入到发酵培养基对胞外粗多糖含量的影响进行了初步的探讨,为这两种马勃的深入研发及利用提供参考依据。方法1、超声辅助提取马勃多糖工艺优化:采用超声辅助提取脱皮马脖子实体粗多糖,以单因素实验为基础,在固定超声频率的条件下,选择提取时间、提取温度、液料比为自变量,溶液中粗多糖提取率为响应值,运用星点设计响应面法(central compo-site design-response surface methodology,CCD-RSM)考察各自变量之间的交互作用对RLSP提取率的影响,确定超声辅助提取RLSP最佳工艺参数。2、多根硬皮马勃液体发酵营养因素的优化:以单因素实验为基础,选择碳源、氮源、无机盐为自变量,发酵液中PSP含量为响应值,运用CCD-RSM考察各自变量之间的交互作用对PSP含量的影响,确定马勃液体发酵的最佳营养因素。3、多根硬皮马勃液体发酵条件的优化:以单因素实验、营养因素优化实验为基础,选择发酵时间、发酵温度、接种量为自变量,发酵液中PSP含量为响应值,运用CCD-RSM考察各自变量之间的交互作用对马勃胞外粗多糖含量的影响,确定马勃液体发酵的最佳发酵条件。4、发酵液中添加中药对马勃胞外粗多糖含量的研究:选取四种不同用药部位的中药,考察它们的水煎液按不同浓度加入液体发酵培养基中,对发酵液中PSP含量的影响。5、多根硬皮马勃粗多糖的体外抑菌活性研究:选取了三种常见致病菌,采用滤纸片法研究不同浓度的PSP溶液对三种致病菌的抑菌效果。结果1、脱皮马勃粗多糖最佳提取工艺条件为:液料比30:1,提取时间53.77min,提取温度58.33℃,粗多糖的提取率为3.88%。2、多根硬皮马勃液体发酵培养基最佳营养因素条件:葡萄糖2.8%,蛋白胨1.8%,硫酸镁0.1%,磷酸二氢钾0.1%,发酵液中PSP的含量为11.03 mg/mL。3、多根硬皮马勃液体发酵培养基最佳培养条件条件:发酵温度26.6℃,发酵时间64.71 h、接种量9.98%,发酵液中PSP的含量为11.73mg/mL。4、木蝴蝶、蔓荆子的添加,对发酵液中粗多糖的含量有促进作用;桑白皮和紫花地丁的低浓度添加,对发酵液中粗多糖含量有较弱的促进作用,高浓度添加有较强的抑制作用。5、多根硬皮马勃粗多糖对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌均有抑制作用。在高浓度时,对金黄色葡萄球菌的抑制能力最强,大肠埃希菌的抑制能力较弱,其抑制能力会随着浓度的降低而减弱;对于铜绿假单胞菌,PSP溶液没有抑制作用。结论对上述3种CCD-RSM优化结果分别进行验证,验证的结果与模型预测值较吻合。因此,该上述3种方法可以考虑作为脱皮马勃子实体中粗多糖的超声波提取工艺和多根硬皮马勃液体发酵工艺的优化与预测;木蝴蝶、蔓荆子、桑白皮、紫花地丁的水提取液均对发酵液中PSP含量的变化产生影响;多根硬皮马勃胞外粗多糖的抑菌能力随浓度的增大而增强,对革兰氏阳性菌的抑菌能力强于革兰氏阴性菌。