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SWEETs糖转运蛋白家族是近几年新发现的一个蛋白家族,它们广泛的分布于真核生物以及原核生物中,SWEETs糖转运蛋白可对多种单糖以及蔗糖进行运输,因此能参与植物中包括植物防御以及花粉发育过程中碳水化合物的供应等多种生理过程,对植物的生长发育有重要影响。但目前对SWEETs糖转运蛋白在逆境方面的研究较少,而对青杄中SWEET蛋白特性的研究更是几乎没有,我们从青杄cDNA文库中分离出一个糖转运蛋白基因PwSWEET1,并对其进行了初步的研究,主要结果如下: 1、本研究从青杄cDNA文库中分离出糖转运蛋白基因PwSWEET1,其cDNA全长为1237bp,编码区为786bp,共编码261个氨基酸残基。经过和拟南芥AtSWEET家族基因进行多序列比对和系统进化树分析表明,PwSWEET1和AtSWEET4、AtSWEET5、AtSWEET6和AtSWEET7的相似性最高。 2、通过组织特异性表达分析表明,PwSWEET1在花粉中表达量最高。激素和非生物胁迫分析表明,其对激素ABA响应明显,表达量高达15倍;在冷害和热激非生物胁迫下,PwSWEET1有不同的表达模式,表达量分别上升和下降。在受到干旱和H2O2胁迫后,青杆PwSWEET1的表达量也显著上升,而在MeJA和NaCl处理下其表达量基本不变。 3、花粉萌发实验预示PwSWEET1可能参与到花粉萌发和花粉管生长过程;0.1%钙离子和0.1%硼酸处理花粉后,PwSWEET1的表达受到硼酸的诱导,推测其可能参与硼相关的花粉生长发育的过程;青杄花粉萌发的糖特异性实验结果表明甘露糖是完全无效糖,蔗糖、麦芽糖和葡萄糖为有效糖,但是最有效的碳源是蔗糖;青杄花粉中PwSWEET1在不同碳源下的表达分析实验暗示PwSWEET1的表达更可能受到蔗糖和葡萄糖的诱导;不同因素对青杄花粉致畸率的影响实验表明0.1%钙离子会诱导花粉畸形,碳源处于不适宜花粉萌发和花粉管生长的最适浓度时可能也会诱导花粉畸形。 4、青杄糖转运蛋白PwSWEET1在酵母中的异源功能验证实验表明,PwSWEET1能够转运葡萄糖,使得pDR196-PwS WEET1酵母转化体在葡萄糖上也能生长。且PwSWEET1的转运特性不依赖于pH。 5、筛选拟南芥AtSWEET4/5/7的T-DNA插入突变体到T3代,成功构建PwSWEET1和拟南芥同源过表达载体待转化,成功构建花粉中特异表达载体Lat52∷PwSWEET1,可用于基因枪轰击花粉瞬时过表达实验。