论文部分内容阅读
目的:在世界范围内,肝癌发病率居恶性肿瘤的第5位,其病死率占恶性肿瘤的第3位。肝癌的发病率呈逐年递增的趋势,预后较差。在东亚地区,肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)作为肝癌的主要病理类型,已成为发病率最高最具威胁的恶性肿瘤。研究发现:遗传调控和表观遗传调控紊乱导致基因异常表达及功能失调参与肿瘤的发生发展。其中,抑癌基因启动子区的甲基化起着至关重要的作用。与遗传学不同,表观遗传学改变是可逆转的,使其成为潜在的疾病治疗靶点。同时,许多研究已经证实DNA异常甲基化在肿瘤形成过程中是可逆的,这也为从表观遗传角度治疗肿瘤提供了理论依据。研究证明:锌指蛋白家族成员——锌指蛋白331(ZNF331)在胃癌和多发性骨髓瘤中具有抑癌作用,ZNF331启动子区异常甲基化导致其表达失活造成肿瘤的发生。而其在肝细胞癌中的研究报道鲜见。本文旨在研究ZNF331在肝细胞癌发生发展中的表观遗传学变化及对其表达的调控作用。结合分析病人的临床资料,阐明ZNF331表观遗传改变和肝细胞癌患者相关临床病理特征的关系,以期获得肝细胞癌诊断和预后的表观遗传学标志物。方法:本研究采用半定量RT-PCR方法在5株肝癌细胞系中检测甲基转移酶抑制剂5-aza-2’-deoxycytidine (5-aza-dc)处理前后ZNF331mRNA的表达变化;应用甲基化特异性PCR检测5株肝癌细胞系(SNU449、HBXF344、PLC/PRF/5、HepG2、BEL-7402)、10例正常肝组织、50例肝细胞癌组织标本中ZNF331的甲基化情况。应用SPSS17.0统计软件包分析ZNF331甲基化和肝细胞癌临床病理特征的相关性,P<0.05认为具有显著性统计学意义。结果:ZNF331在肝癌细胞系HBXF344、PLC/PRF/5、HepG2、BEL-7402中低表达,SNU449中表达正常。5-Aza处理后HBXF344、HepG2、BEL-7402及PLC/PRF/5中ZNF331表达恢复正常。50例原发性肝细胞癌标本中,ZNF331启动子区的甲基化率为80%(40/50),而10例正常肝脏组织中ZNF331启动子区均无甲基化。ZNF331启动子区的甲基化与肝细胞癌患者的性别、年龄、肿瘤直径大小、血清甲胎蛋白值、肝炎病毒感染、分化水平及TNM分期均无关联(p>0.05)。结论:本文的研究结果显示ZNF331启动子区甲基化率在肝癌细胞系及肝细胞癌组织中明显高于正常肝组织。结果表明ZNF331在肝细胞癌中存在启动子区异常高甲基化,ZNF331启动子区高甲基化是肝癌的频发事件,提示ZNF331甲基化可能成为肝癌的早期诊断标志物。且ZNF331基因表达受启动子区甲基化调控,有望进一步研究应用于肿瘤的分子靶向治疗。