竹叶黄酮对肉鸡的生物效应及作用机理研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 13次 | 上传用户:xiaoge1011
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竹叶黄酮是属于黄酮类化合物主要从竹叶中提取,目前应用在医药卫生和食品生产中,但在肉鸡生产中应用较少。本文通过研究竹叶黄酮的最佳提取工艺及体外抑菌、抗氧化效果,对肉鸡的安全性评价,对肉鸡急性肝损伤的保护效果,对肉鸡免疫功能的影响,对盲肠菌群多样性的影响,在热应激状态下和常规饲养下对肉鸡生产性能等生物效应的影响和作用机理,为其在生产中应用提供理论依据。试验一:应用超声波辅助提取考察浸提剂体积分数、浸提时间、温度、液料比对毛竹、慈竹、琴丝竹、牧竹4种竹叶提取率的影响,并考察了其抑菌活性及抗氧化活性。结果表明:四种因素对试验结果影响大小依次为:乙醇体积分数B>反应时间A>提取温度C>液料比D,其最佳提取工艺为:体积分数76%7,醇溶液在液料比10:1(mL/g、70℃C水浴条件下浸提1.5h。在此工艺条件下,毛竹、慈竹、琴丝竹、牧竹的提取率分别为:16.25%、12.35%、9.58%、5.49%。对大肠杆菌和沙门氏菌的敏感性大小为:慈竹>琴丝竹>毛竹>牧竹,对金黄色葡萄球菌的敏感性大小为:慈竹>毛竹>牧竹>琴丝竹。测得4种竹叶黄酮的抗氧化活性为:对氧自由基的清除率:慈竹>琴丝竹>毛竹>牧竹;对羟自由基的清除率:慈竹>毛竹>琴丝竹>牧竹;对DPPH自由基的清除率,慈竹>毛竹>琴丝竹>牧竹。表明竹叶黄酮具有较好的抑菌作用和抗氧化活性,其中慈竹提取的竹叶黄酮抑菌作用和抗氧化活性最好。试验二:竹叶黄酮对肉鸡的安全性评价。选取200只1d健康肉鸡随机分成5个处理组,每个处理组40只,分为4个重复笼饲养,每个重复笼10只。以临床推荐剂量的1、3、5、10倍对肉鸡连续7d给药。结果表明:给药期间,肉鸡生长正常,3倍剂量组显著提高肉鸡体重、红细胞数量及白细胞重量;3、5倍剂量组显著提高抗氧化指标及脾、法氏囊指数,而剂量过大效果降低;给药组血清中AST与ALT、 BUN与CRE含量与对照组差异不明显;10倍剂量组与对照组相比,主要器官的组织结构均未发现异常变化。以上说明竹叶黄酮安全、低毒,临床应用安全。试验三:竹叶黄酮对肉鸡急性肝损伤的保护作用。选取36只37d健康雄性肉鸡,随机平均分成6组,以CC14制备急性肝损伤模型。其中为空白组,模型组,阳性药物组,低、中、高剂量(20mg、40mg、100mg/kg.b.w)竹叶黄酮给药组。结果表明:模型组增重率显著低于其他组(P<0.05),肝脏、脾脏、肾肿胀明显,颜色加深,器官指数相高于空白组;血清中ALT和AST、MDA的活性高于其他组,SOD值低于其他组。阳性药物组和给药组血清中主要生化指标与空白组差异不显著,TC、TG维持一定的稳定状态。同时,给药组还能减轻CCl4对肝细胞的损害,基本维持肝细胞的增殖、分化,抑制肝细胞的过度凋亡。竹叶黄酮可以通过提高机体抗氧化能力,减轻脂质过氧化损伤,保证肝脏细胞对脂肪正常代谢来发挥保肝作用的。本试验中40mg/kg.b.w效果最佳。试验四:竹叶黄酮对肉鸡免疫器官和免疫功能的影响。选取300只1d雄性肉鸡,随机4组,每组3个重复,每个重复25只。除对照组外,其余3个组分别在基础日粮中添加200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg剂量的竹叶黄酮,试验为期42d。结果显示:竹叶黄酮可以提高免疫器官指数,促进免疫器官发育,提高EtRFC%,促进脾脏、胸腺和法氏囊淋巴细胞的增殖和分化,抑制细胞凋亡。试验组的ND和AI的抗体滴度得到提升,促进了脾脏IL-2和IFN-γ基因的表达,提高血清中IL-2和IFN-γ的含量。试验表明竹叶黄酮具有增强肉鸡免疫的功效。试验五:竹叶黄酮对肉鸡盲肠菌群多样性的影响。试验分组同试验四,使用Illumina MiSeq高通量测序技术分析竹叶黄酮对肉鸡盲肠菌群多样性的影响。结果显示:高通量测序获得了1,240,937条有效序列,平均每个样品34,470条序列;根据97%的序列相似性得到95,287个OTUs。其中优势菌群为厚壁菌门Firmicutes,拟杆菌门Bacteroidetes,放线菌门Actinobacteria和变形菌门Proteobacteria。竹叶黄酮组在各时间点与对照组比较在菌群属水平上差异显著。结果表明竹叶黄酮能显著影响肉鸡肠道菌群种类的多样性,并呈剂量依赖性。试验六:竹叶黄酮对热应激下肉鸡生产性能的研究。选取7d肉鸡150只,随机分成5组,每组3个重复,每个重复10只。除对照组外,其余4个组分别在基础日粮中添加400mg/kg、800mg/kg、1600g/kg、3200mg/kg竹叶黄酮,试验期5周。结果显示,添加竹叶黄酮可以降低料重比,提高屠宰性能,改善肉色,降低煮熟损失率、提高系水力和肌肉嫩度。竹叶黄酮添加组血清中MDA含量、AST活性显著下降,T-AOC、SOD舌性升高:肝组织SOD上升,MDA含量下降;胸肌中T-AOC、SOD活性提高;腿肌中SOD活性提高,MDA含量降低。说明竹叶黄酮能通过提高肉鸡抗氧化能力,从而改善肉鸡热应激下的生产性能,提高其屠宰性能,改善肌肉品质。本试验中1600mg/kg竹叶黄酮添加量抗热应激效果最佳。试验七:竹叶黄酮通过遗传途径对肉鸡生产性能的影响。试验分组同试验四。竹叶黄酮能促进肉鸡生长,提高饲料转化率,提高屠宰性能,改善肉质。同时,竹叶黄酮显著提高了血液中SOD、T-AOC、CAT的活力,并降低了MDA含量,降低血液中TG、TC的含量,提高HDL-C含量,从而影响肉鸡血脂水平;对ALB、AST、 BUN值无显著影响。竹叶黄酮还能通过调节肝脏中PPARγ、ATGL、ADSL基因和胸肌中的LPL基因.ADSL基因的表达来影响肉鸡的脂肪代谢,提高肌肉中肌苷酸含量,从而改善鸡肉风味。综上所述,竹叶黄酮在体外具有抑菌、抗氧化作用,10倍临床给药剂量对肉鸡安全、无毒。竹叶黄酮对CCL4造成的肝损伤能通过提高机体的抗氧化能力,促进肝细胞增殖分化、减少凋亡作用发挥保肝功能。日粮中添加竹叶黄酮能提高脾脏IL-2和INF-γ基因的表达,提高血清中IL-2和INF-γ的含量,促进免疫器官的发育而增强肉鸡的免疫功能;增加盲肠优势菌群的丰度。竹叶黄酮通过提高抗氧化水平缓解热应激对肉鸡生产性能的影响;提高正常饲养肉鸡的生产性能,对肝脏中PPARγ、 ATGL、ADSL基因和胸肌中的LPL基因、ADSL基因调控影响脂肪沉积与肌苷酸含量。
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