银屑病是一种由T细胞介导的自身免疫性疾病,大量文献表明中药治疗银屑病具有良好的效果。选择合适的动物模型是研究银屑病的发病机理及中药治疗机制的基础。银屑病以Th1型细胞及其细胞因子占优势,寻找一种能体现银屑病的这一生物学特点的动物模型显然对研究非常必要。本研究采用国际上认可的甲状腺球蛋白及高碘水诱导的大鼠自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型,在血清抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)水平上评价不同抗银屑病阳性药物及中药疗效的同时,利用基因芯片技术高通量、高度并行性、高灵敏度的优势,从整体基因组的角度对不同抗银屑病阳性药物及中药调节Th1/Th2平衡的分子机理进行研究。另外,对长海医院治疗银屑病的经验方——消银方对血热证型银屑病患者Th1/Th2平衡的免疫调节作用进行了研究。第一部分实验性自身免疫性甲状腺炎模型的建立目的验证EAT模型的建立方法及其对外周血Th1/Th2偏移的影响。方法运用猪甲状腺球蛋白和高碘水(0.05%)在健康Wistar大鼠上复制自身免疫性甲状腺炎模型,同时设立正常大鼠为对照组。7周后,观察甲状腺组织病理改变和检测血清中TgAb水平。Realtime-PCR法研究大鼠外周血单一核细胞TNF、IL-10mRNA的表达情况。结果模型组大鼠血清中的TgAb水平与正常组比较,高出约3倍之多,其甲状腺组织亦发生明显的炎症反应,多数动物的淋巴细胞浸润指数均≥2(87.5%)。模型组外周血单一核细胞表达TNF mRNA水平升高,但IL-10mRNA水平下降(,P<0.05)。结论根据形成EAT的2个标准即TgAb水平和甲状腺组织淋巴细胞的浸润程度,可以认为同时采用Tg加高碘水免疫动物,可成功建立EAT动物模型。自身免疫性甲状腺炎大鼠存在一定程度的Th1细胞因子偏态性,为其作为银屑病体内动物模型提供一定的理论依据。第二部分不同抗银屑病药物治疗EAT模型的疗效研究目的研究不同抗银屑病药物治疗EAT模型的疗效。方法建立EAT模型,随机分成模型组、环孢素A组、雷公藤组及中药消银方组,给予灌胃治疗(模型组给予生理盐水,环孢素A组25mg/kg/d,雷公藤组2.75mg /kg/d,消银方组2g/kg/d), 4周后,处死大鼠,观察甲状腺组织病理改变和检测血清中TgAb水平。结果EAT组大鼠血清中的TgAb水平明显高于环孢素A组、雷公藤组及消银方组(P<0.01);消银方组与环孢组、雷公藤组之间无明显差异(P>0.05);EAT组大鼠甲状腺炎症严重程度与上述各组之间无明显差异(P>0.05)。结论环孢素A、雷公藤多甙及消银方对EAT模型大鼠的TgAb均有一定的下调作用。而在甲状腺的炎症严重程度改善方面,各治疗组与对照组之间无明显变化,这可能与我们的给药时间、给药剂量及部分EAT模型大鼠已经发生的甲状腺细胞破坏情况不可逆转相关。因此,可以用环孢素A及雷公藤多甙来作为评价抗银屑病中药疗效的阳性对照,以TgAb水平作为判断药物是否起效的标准,并且在研究过程中应注意预防性用药或加长疗程。消银方治疗EAT模型有效,符合中医“异病同治”的原理,为研发新的治疗Th1型疾病药物或老药新用开拓思路。第三章不同抗银屑病药物治疗实验性自身免疫性甲状腺炎模型的基因芯片研究目的分析不同抗银屑病药物作用前后EAT大鼠外周血单一核细胞基因表达谱的差异性,寻找不同药物调节Th1/ Th2平衡的相关基因并分析其可能机制。方法将上述各组大鼠外周血PBMC提取后混合计数,提取总RNA,反转录成cRNA,与基因芯片进行杂交,Scan Array Scanner扫描仪进行扫描,GEArray软件分析,筛选出不同药物治疗前后表达有差异的基因。芯片结果用荧光定量聚合酶链反应进行验证。结果筛选出三组共同表达基因,其中有1条基因(IL-10)三组共同显著上调;有9条基因(CD28、CD69、Fadd、IL18、Socs3、Socs6、Stat1、Tnfsf5、Tnfsf6)共同下调。筛选出中药消银方治疗组特异性表达基因13条(Ccr4、Cd2、C2ta、Gfi1、Gpr2、Il1r1、Mapk10、Nfatc4、Nfκb、Tyk2、Socs4、Tbx21、Tnfrsf9)特异性下调表达。结论各抗银屑病药物均通过上调Th2细胞因子IL-10表达,下调Th1型相关基因表达以调节Th1/Th2平衡,其中Socs3、Socs6、Stat1、Tnfsf6等基因可能参与调节Th1/Th2平衡,为深入研究银屑病发生、发展、缓解机制,及针对某些信号转导途径和相关基因进行药物研制、开发提供了理论依据。中药消银方治疗银屑病的可能机制除上述的共同机制外,尚涉及TNF配体及其受体家族、TNF相关的细胞信号转导途及特异性Th1/Th2转录因子Gata3/ Tbx21等,为消银方用于治疗银屑病提供了依据。第四章消银方对血热证型银屑病患者的疗效及对外周血Th1/Th2平衡的影响目的从消银方对血热证银屑病患者的疗效及血清中细胞因子影响,探讨消银方治疗银屑病的作用机理。方法观察32例寻常性银屑病患者治疗前后PASI评分、中医辨证评分的变化及血清中TNF-α、IL10水平变化。结果血热证患者治疗前后TNF-α水平有明显差异(P<0.05),而IL-10无明显差异(P>0.05),PASI评分与银屑病患者TNF-α分泌水平呈正相关性(P<0.05)。结论消银方可通过降低血清TNF-α水平,从而起到治疗银屑病的作用。