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随着器官移植领域的飞速发展，对器官保存液的要求也是越来越高。不仅仅要具有良好的保存效果，而且还要易于配制及储运；以发展的眼光来看，将来的的器官保存液不仅要具有保存效果，同时还会利用基因工程技术将具有免疫抑制活性的调节分子，例如IL-10，CTLA-4Ig，TGF-β，FasL等借助基因载体加入到保存液当中，从而使要移植的器官不仅得到了良好的保存，而且在灌洗保存中即获得了免疫耐受的能力，这必将大大降低移植术后的器官排异发生率。我们计划分两大块来实施该项研究：一、研制出一种价廉物美、易于自行配置、易于运输、更适合我国国情的多器官保存液。二、将基因治疗成分加入到保存液中。我现在进行的是第一步的工作。 在全面分析UW液和HTK液组分的基础上并结合我国传统医学的优势，制定了如下的多器官保存液配方： 多器官保存液的主要成分 成分 含量 组氨酸/组氨酸盐酸 180mmol/L/18mmol/L（24840mg/L/1314mg/L） 木棉糖 30mmol/L（17835mg/1） KH2PO4 25mmol/L（3375mg/L） 腺苷 5mmol/L（1225mg/L） 谷胱甘肽（还原型） 3mmol/L（922mg/L） 别嘌醇 1mmol/L（136mg/L） 维拉帕米 20mg/L 右旋糖酐—40 50g/L 银杏叶提取物（黄酮 400mg/L 色氨酸 2mmolL（472mg/L） PH:7.45±0.01 渗透压：320～340mmol/kg 该多器官保存液的特点如下： 第＿：军医大学恤十毕业论义 1、以组氨酸／组氨酸盐酸替代乳糖醛酸，其浓度比为 180／18（mmoMi）在D此高浓度的缓冲对作为一种非渗透性成分，能明显抑制组织的酸化。二、以低分子右旋糖酥－－ngo（DEX——40）替代羟乙基淀粉，这不仅降低了成本，而且可增加保存效果，有证据表明，用DEX——40替代羟乙基淀粉进行肝脏保存48小时后，其胆汁分泌功能未见改变，而UW液对照组下降65％；用DEX－－－－40替代HES保存胰腺72小时后，移植后存活率高于UW液组。现在认为DEX－－40对微循环有较好的作用，有利于再灌注，而且价格便宜。3、加用了具用细胞膜稳定作用的色氨酸。4、应用具有可清除氧自由基作用的银杏叶提取物，银杏叶即含有超氧化物歧化酶，能清除氧自由基；又含有黄铜类化合物，可直接清除氧自由基；又含有菇类银杏内酯，可间接通过阻滞嗜中性粒细胞PAF受体减少氧自由基生成。西欧从银杏叶提取物相当于生药的1150的EGb－761，含银杏黄铜贰24％、砧类6％。在几种体外试验中皆有抗自由基作用，在捕捉羟基和二苯苦味酞盼基方面的活性，与己知的自由基清除剂尿酸的效力相当。5、去掉uw液中多种添加成分。6、添加钙离子桔抗剂－维拉帕米及Na＼K”通道阻滞剂奎尼丁、四乙基胺、阿米洛利。钙离子桔抗剂－维拉帕米能够抑制细胞的钙超载，减轻低温保存期间细胞膜、线粒体膜和内质网膜上钙泵的负荷，减少了对能量的需求，细胞内的能量平衡因为减少了能量消耗而得以长期维持，因此起到了保护作用。但是，钙离于低温下的调节作用机制并不是单一孤立的，其中钠、钾离子调节与钙离子的调节是相互关联的。常温下，离于调节消耗大量能量，在低温保存条件下，离子紊乱加重，维持离子平衡相对需要更多的能量。因此，如果应用离子通道阻滞剂减少离子跨膜势能，必定会减少离子泵的负荷，减少能量消耗。四乙基胺能够阻滞纳钙协同转运机制，奎尼丁可以阻滞电压依赖的Na”－K”通道，阿米洛利可以阻滞钠氢交换通道，三者在保存中可以在相当程度上减少因钠钾离子紊乱带来的细胞水肿，而且四乙基胺还可以在一定程度上阻滞钠钙交换，减轻钙离子超载，因此在其作用下，Na“－K泵的负荷明显减轻，能量消耗降低。细胞内的钠、钾和钙离于是细胞内环境中最重要的离子之一，低温下钠离子进入细胞内，钾离子排出细胞外，细胞因此发生水肿。低温下细胞内还可以形成严重的钙超载，激发钙离子依赖的损伤机制，对细胞造成损伤。应用离子通道阻滞剂可以减轻细胞内的离子紊乱，减少能量的消耗，而有效的能量储备又会对离子紊乱的调节起到 －6－ 第二军医大学颀卜毕业论文平衡作用，因此形成一个良性循环。 一种成功的器官保存液的组成应满足下列五个要求：（l）减少因低温保存导致的细胞水肿；（2）防止细胞的酸化作用；（）防止灌洗保存过程中的细胞间隙膨胀：（4）防止或减轻再灌注损伤；6）提供再生高能磷酸化合物的底物。所以，为了验证该多器官保存液的效果，我们进行了犬的肝脏和肾脏的保存试验及保存后器官的移植试验。在保存实验中，我们分别进行了不同保存时间后的肝脏和肾脏组织形态学的观察、能量物质的测定、生物化学的改变以及保存液PH值的测定。在移植试验中，在兄弟单位的协助下，我们分别进行了犬的肝脏和肾脏的移植试验。通过以上试验?