白眉蝮蛇去整合素Adinbitor在毕赤酵母中的表达及其生物学活性

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目的:白眉蝮蛇去整合素Adinbitor在毕赤酵母中的表达及对其生物学活性的初步研究。 方法:实验中首先设计带有限制性内切酶EcoRⅠ与NotⅠ位点的引物,采用PCR的方法得到AdinbitorcDNA。将AdinbitorcDNA进行克隆、转化与诱导后,得到了该蛋白的分泌性高效表达;经凝胶过滤层析纯化。利用兔富含血小板血浆的测试系统和鸡胚绒毛尿囊膜(chickchorioallantoicmembrane,CAM)模型进行血小板聚集实验和体内血管新生抑制实验。 结果:成功构建重组质粒pPIC9K-Adinbitor并在毕赤酵母GS115中表达了去整合素rAdinbitor。rAdinbitor可呈剂量依赖性抑制ADP诱导的兔血小板聚集。关于血管新生的实验结果表明,rAdinbitor可显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)的血管生成,表明rAdinbitor为血管新生的有效抑制剂。 结论:本论文通过基因工程的方法成功的构建了真核表达载体pPIC9K-Adinbitor,利用毕赤酵母表达体系得到了rAdinbitor的分泌性高效表达,其具有显著抑制血小板聚集和抑制体内血管新生的作用。所有这些实验结果都提示了毕赤酵母表达的rAdinbitor作为一种抗血栓和抗肿瘤新药的潜在应用价值。
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