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作为我国养蚕生产上危害较大的蚕病为家蚕质型多角体病毒（Bombyx mori Cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV）病和家蚕核型多角体病毒( Bombyx mori nuclearpolyhedrosis virus，BmNPV)病。本研究基于本实验室已有的实验基础及研究结果，对BmCPV和BmNPV入侵家蚕细胞的分子机制进行了进一步的研究。 通过生物信息学分析软件对BmCPV9候选蛋白进行功能分析，9种蛋白是：钙网蛋白(Calreticulin, CRT)，网格蛋白(Clathrin, CLAT)，整合素β(Integrin beta,ITGB)，BMKETTIN(BMKT)，核输入蛋白(Importin alpha,IPOA)，衔接蛋白(Adaptor protein,AP)，激活蛋白激酶受体(Receptor for activated protein kinase C，RACK)，受体型鸟苷酸环化酶(Receptortype guanylyl cyclase,Gcy)，阿片结合蛋白(opioid-binding protein,OPB)，深入了解候选受体的生物学功能及分布特点，通过蛋白在生物中所起的作用，研究病毒在家蚕感染中可能采用的入侵方式；对BmCPV候选受体基因（Receptor type guanylyl cyclase,opioid-binding protein,BMKETTIN，Calreticulin,Importin alpha）进行原核表达，将表达的蛋白免疫小鼠制备抗候选受体的多克隆抗体；用制备的多克隆抗体进行抗体封闭实验探讨抑制候选受体功能表达后对BmCPV增殖的影响。 生物信息学分析结果显示，CRT具有三个功能结构域，即信号肽、钙网蛋白及卷曲螺旋区，钙网蛋白家族主要与ER结合发挥作用；CLAT主要由网格蛋白区和网格蛋白重链同源重复区组成，网格蛋白是一种细胞质蛋白，聚集在细胞内膜多面体晶格中形成一个蛋白包被的膜通道；ITGB主要有整合素β亚基、RPT区、跨膜区和整合素-b-cyt结构域，它介导的是细胞与胞外基质、细胞与细胞间的相互作用；BMKETTIN主要有IGc-2和IG结构域；IPOA主要有8个ARM重复结构域，它可介导β-连环蛋白与它的配体的相互作用；AP主要有衔接蛋白-N结构域和α-衔接蛋白-C2结构域，它可能与膜蛋白的胞质尾相互作用；RACK由7个WD40结构域组成，与蛋白结合相关；Gcy主要由ANF结合域、跨膜结构域、酪氨酸激酶结构域和腺苷酰/鸟苷酸环化酶，催化结构域组成，主要功能是细胞内信号转导；OPB具有信号肽、RPT区、类IG区、IG区和跨膜结构域，OPB与细胞识别相关。 用制备的多克隆抗体对家蚕细胞进行相应的抗体封闭结果显示，抗体封闭住受体蛋白后，BmCPV的感染效率明显下降。与对照组相比，高浓度的IPOA、CRT、GCY、OPB的对BmCPVS1基因的抑制效率最明显，抑制率分别为78.6％、59%、54%和98%。 基于对BmCPV的一系列研究，家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,BmNPV）入侵家蚕细胞时，BmNPV与细胞的相互作用蛋白之间的关系也引起我们的关注。通过查阅文献资料，我们猜想BmNPV与细胞的相互作用蛋白可能与脂筏有密切联系。 用抗BmNPV病毒抗体，采用VOPBA的病毒受体候选方法并结合质谱鉴定及生物信息学分析，筛选出可能与BmNPV相互作用的蛋白，共筛选出6种蛋白，分别是肌动蛋白（actin），轻链驱动蛋白异构体-X2（kinesin light chain-like isoform X2），E3 SUMO-蛋白连接酶PIAS3-like异构蛋白X3（E3 SUMO-protein ligase PIAS3-like isoform X3），SKI家族转录辅共阻遏物-2（SKI family transcriptional corepressor2-like），膜联蛋白B13（annexin B13），热激蛋白90（heat shock protein90），类自整合障碍因子B（barrier-to-autointegration factor B-like）。 甲基-β-环糊精（Methyl-beta-cyclodextrin，MβCD）可除去脂筏上的胆固醇，本研究用20uM的MβCD处理细胞后，荧光显微镜观察BmNPV入侵BmN情况，结果显示与对照相比，显微镜检测不到绿色荧光。当添加外源胆固醇后，荧光被观察到。结果表明说明BmNPV入侵细胞可能也与细胞膜表面的胆固醇有关，或者与细胞膜中脂筏的完整结构有关。当用不同浓度的MβCD处理BmNPV-GFP后荧光显微镜观察显示，4u MMβCD处理的BmNPV-GFP对细胞几乎没有侵染能力。 研究结果为深刻了解BmCPV和BmNPV入侵的分子机制提供了新的线索。