鲑鱼降钙素对磨损颗粒诱导后人巨噬细胞RANK/RANKL/OPG骨溶解通路影响的研究

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目的:通过检测经磨损颗粒刺激诱导后的人巨噬细胞在鲑鱼降钙素干预下RANK、RANKL、OPG的mRNA表达的变化,来探讨鲑鱼降钙素对人巨噬细胞的RANK/RANKL/OPG骨溶解通路的影响。方法:从一名发生髋关节假体松动需行翻修手术患者的髋臼侧假体周围所获得的界膜组织中提取聚乙烯磨损颗粒,经过滤后收集平均大小在0.2um-10um范围内的磨损颗粒;用MTT法测出人巨噬细胞对于聚乙烯磨损颗粒(浓度为0.1mg/ml)的最佳反应细胞浓度,并用此细胞浓度进行下一步实验;用磨损颗粒刺激人的巨噬细胞,并用不同药物浓度的鲑鱼降钙素进行干预,将磨损颗粒及巨噬细胞随机分成五组,每组六份:A组为单纯巨噬细胞组;B组为颗粒+巨噬细胞组(无降钙素);C组为颗粒+巨噬细胞+高浓度降钙素(10-8mol/L)组;D组为颗粒+巨噬细胞+中浓度降钙素(10-10mol/L)组,;E组为颗粒+巨噬细胞+低浓度降钙素(10-12mol/L)组,共同培养48小时后,用QPCR方法检测巨噬细胞RANK、RANKL、OPG的mRNA表达。结果:1、RANK表达:颗粒刺激后B组较A组表达升高,B组与其他各组比较P<0.01,差异有统计学意义;鲑鱼降钙素药物干预后,RANK表达量下降,C组分别与D组、E组相比,皆P<0.01;而D组和E组相比差异不显著,P>0.05,无统计学意义。2、表达:颗粒刺激后B组表达较A组升高,两者比较差异显著(P<0.05);药物干预后C、D、E组皆明显低于B组,C、D、E组分别与B组比较,皆P<0.01,差异显著,有统计学意义;而D组分别与C、E组两两比较,皆P<0.01,差异显著;C、E两组比较,P>0.05,差异不显著,无统计学意义。3、OPG表达:A组表达最高,高于其他各组,差异显著(皆P<0.01),颗粒刺激后B组表达下降,药物干预后表达有所上升,B组与C、D组比较差异显著,P<0.05,B组与E组比较差异不显著,P>0.05,E组分别与C、D组比较差异显著,P<0.05,C组与D组比较差异不显著,P>0.05。4、RANKL/OPG:B组的RANKL/OPG比率最大,药物干预后,比率皆下降,且在药物干预组中C组的比率最小。结论:1、磨损颗粒刺激诱导后的人巨噬细胞有RANK、RANKL、OPG表达;2、磨损颗粒刺激诱导后RANKL/OPG比例成上升趋势,有诱导巨噬细胞向破骨细胞转化的作用;3、降钙素药物干预后,可降低RANKL/OPG比例,有阻止巨噬细胞向破骨细胞转化的作用。
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