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研究目的1.分离、培养BMSCs，用于治疗心肌梗死。2.建立心肌梗死模型，为BMSCs治疗心肌梗死奠定基础。3.通过诊断超声介导微泡破坏联合冠状动脉内移植促进BMSCs归巢梗死心肌，为临床治疗心肌梗死探索新的方法。方法1.骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及体外标记用注射器穿刺犬肱骨，抽取10ml骨髓，与等体积肝素混合；用Percoll密度梯度离心法分离骨髓液。将获得的单核细胞去除未贴壁细胞如红细胞、巨噬细胞等，得到骨髓间充质干细胞，然后接种培养，细胞生长至70%以上时传代。3w后做免疫组化鉴定。冠状动脉移植BMSCs24h前掺入BrdU。2.实验犬共24只，每只注入适量造影剂，充盈OTW球囊堵塞冠状动脉前降支，阻断血流，使气囊保留在前降支中4h。3.诊断超声介导微泡破坏联合冠状动脉内移植促进BMSCs归巢梗死心肌，其方法是造模组犬随机分为PBS组、超声+微泡+PBS组、BMSCs组、超声+微泡+BMSCs组4组，每组6只犬，造模7d后，超声+微泡+BMSCs组每只犬于注入BMSCs前给予诊断超声介导微泡破坏后，随后用5ml生理盐水进行冲洗，然后经OTW球囊导管中心腔将冠状动脉近端边缘完全堵塞后由远及近于2min内向冠状动脉内注入2×107个P已用BrdU标记的第3代BMSCs。BMSCs组不给予诊断超声介导微泡破坏,仅用5ml生理盐水进行冲洗后以同样方法自冠状动脉内注入同样的BMSCs。超声+微泡+PBS组每只犬于注入PBS前给予诊断超声介导微泡破坏后，随后用5ml生理盐水进行冲洗，然后以同样方法向冠状动脉内注入2mlPBS。PBS组不给予诊断超声介导微泡破坏,仅用5ml生理盐水进行冲洗后以同样方法向冠状动脉内注入2ml PBS。结果1.分离、培养BMSCs1w后获得BMSCs数量为1×107个，为1盘,10ml。3w后传代2次，获得BMSCs数量为24×107个，为24盘；免疫组化鉴定：CD34阴性，CD44阳性；MTT细胞生长曲线分析：BMSCs的生长状态良好；体外免疫组化标记显示细胞核染为棕褐色，证明BrdU掺入细胞核中。2.造模组冠状动脉造影录像与图片显示阻塞部位为第一间隔支和第二间隔支之间，阻塞部位以下再无造影剂充盈，前向血流中断4h；心彩超显示心功能较造模前下降，MCE显示DA%升高；24只实验犬全部存活。3.与造模后4小时、造模后7d比较，单纯冠状动脉移植BMSCs和超声+微泡+冠状动脉移植BMSCs均可以显著改善心功能、WMSI及DA%(P＜0.05)，PBS和超声+微泡+PBS均不能改善心功能、WMSI及DA%(P＞0.05)。与BMSCs组比较，超声+微泡+BMSCs组改善心功能、WMSI及DA%的效果更显著(P＜0.05)，缩小心肌梗死面积的效果更显著(P＜0.05)，BMSCs在犬心肌缺血区存活数量显著增加(P＜0.05)；超声+微泡+BMSCs组与BMSCs组均表达具有心肌特异性的与心肌细胞的收缩功能相关的α-肌动蛋白，超声+微泡+BMSCs组染色的细胞数量多于BMSCs组。4.经相关系数的假设检验（P≤0.01），反映左室灌注缺损面积的DA%与心肌梗死面积占左心室心肌横断面面积的百分比正相关，r=0.97。结论：1.证实密度梯度离心联合贴壁培养法是分离、纯化、扩增BMSCs简便、易行的方法。2.球囊充盈阻断冠脉可建立稳定的犬MI模型。3.超声+微泡+冠状动脉移植BMSCs和单纯冠状动脉移植BMSCs均可缩小心肌梗死面积和灌注缺损面积、改善心功能和WMSI、促进BMSCs在心肌内存活，前者效果更显著；均可表达α-肌动蛋白，前者α-肌动蛋白染色阳性的细胞数多于后者。这为心肌梗死的干细胞临床治疗提供了经验。4反映左室灌注缺损面积的DA%与心肌梗死面积占左心室心肌横断面面积的百分比正相关，r=0.97，说明DA%在反映心肌梗死面积方面与病理指标心肌梗死面积占左心室心肌横断面面积的百分比有同等价值。