论文部分内容阅读
研究目的:基于MAPKs信号通路,研究黄芩苷对脂多糖所致HBE16细胞粘液高分泌的干预机制。研究方法:利用CCK-8(Cell counting kit-8)法探索LPS(Lipopolysaccharides,LPS)刺激HBE16细胞构建体外粘液高分泌模型最佳干预时间和干预浓度,并探索系列浓度(0.01μg/ml-1000μg/ml)黄芩苷对HBE16细胞的最大干预浓度。根据黄芩苷最大干预浓度选择合适的处理浓度并进行干预分组,主要分组为对照组、LPS组、黄芩苷干预组(黄芩苷3个不同浓度10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml);利用ELISA(Enzyme Linked Immuno-sorbent Assay)法检测细胞培养上清液中MUC5ac的表达水平;RT-PCR(Reverse transcription-polymerase chain reaction)法检测细胞RNA中MUC5ac mRNA表达水平;Western Blotting法检测MAPKs(Mitogen-activated protein kinases)信号通路关键蛋白phospho-Erk(Extracellular regulated protein kinases)、phospho-p38、phospho-JNK(c-Jun N-terminal kinase)的表达水平。研究结果:ELISA法检测MUC5ac表达水平结果示:与对照组相比,LPS组中MUC5ac蛋白水平升高(P<0.05);与LPS组相比,除6小时时点外(P>0.05)黄芩苷干预组中MUC5ac蛋白水平降低(P<0.05),其中在24、48小时差异最为明显(P<0.01);在同一观察时点,除6小时时点外,黄芩苷对MUC5ac的分泌抑制呈现剂量依赖关系。RT-PCR法测定MUC5ac mRNA表达结果示:与对照组比较,除6小时时点外,LPS组MUC5ac mRNA的表达水平明显升高(P<0.01);与LPS组比较,黄芩苷干预组MUC5ac mRNA的表达水平明显下降(P<0.01);并且在12、24、48小时观察时点,黄芩苷干预组MUC5ac mRNA的表达水平呈现剂量依赖的特点,尤以24小时明显。Western Blotting法测定MAPK关键蛋白的表达结果示:与对照组相比较,LPS组phospho-Erk、phosphop38、phospho-JNK蛋白表达明显增加(P<0.01);与LPS组比较,黄芩苷干预组phospho-Erk、phospho-p38、phospho-JNK蛋白表达均降低(P<0.05),尤以黄芩苷50μg/ml、100μg/ml组结果明显。研究结论:黄芩苷可以通过调控MAPK信号通路中phospho-Erk、phospho-p38、phospho-JNK的表达,抑制LPS所致的人气道上皮细胞中MUC5ac mRNA的表达和MUC5ac的分泌,从而发挥抑制细胞粘液高分泌作用。