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第1章引言急性心肌梗塞在心血管疾病中发病率和死亡率极高,缺血/再灌注损伤仍是急性心肌梗塞临床治疗中面临的难题。如何减轻缺血/再灌注损伤是心肌损伤与保护的研究热点。研究心肌损伤发生机制,将有助于我们为临床防治心肌缺血损伤提供理论和实践依据。因此,我们基于lncRNA-miRNA-Notch1调控假说,建立心肌细胞缺氧/复氧损伤及自噬保护模型,通过高通量测序技术及生物信息学比较分析,筛选出在自噬保护中具有调控Notch1蛋白作用的miRNA,以及具有调控该miRNA的lncRNA,为研究Notch1信号通路在自噬性心肌保护的分子机制提供科学依据。第2章Notch1信号通路增强自噬对抗心肌缺氧复氧损伤的保护作用目的:筛选有效调控自噬的3-MA及RAPA试剂浓度,以及探讨Notch1信号通路在自噬对抗心肌缺氧复氧损伤中的作用。方法:建立心肌细胞损伤模型,给予3-MA、RAPA干预,检测细胞活力,筛选3-MA及RAPA有效试剂浓度;利用Ad-N1ICD及Ad-N1ICD-shRNA干预Notch1信号通路,检测H/R损伤中心肌细胞活力情况。结果:本研究中3-MA和RAPA最佳试剂浓度分别为1μM和50nM;Notch1过表达可提高H/R的心肌细胞活力(p<0.01),干扰Notch1可明显降低H/R心肌细胞活力(p<0.05);3-MA加入Notch1过表达组中,H/R的心肌细胞活力再次降低(p<0.01),RAPA加入Notch1干扰组中,H/R的心肌细胞活力恢复(p<0.01)。结论:Notch1信号通路可增强自噬对抗心肌缺氧复氧损伤发挥保护作用。第3章高通量测序及生物信息学筛选自噬性心肌保护中Notch1信号通路相关miRNA及lncRNA目的:借助高通量测序及生物信息学比较分析筛选在自噬性心肌保护中具有调控Notch1信号通路的关键miRNA及lncRNA。方法:提取心肌缺氧/复氧损伤中的总RNA,借助高通量测序及生物信息学分析系统,筛选具有差异表达的miRNA及lncRNA。结果:筛选出了可能调控Notch1基因表达的miR-702-5p、miR-344g、miR-323-5p、miR-6334、miR-5132-5p、miR-15b-5p、miR-3562;生物信息学分析发现lncRNA-4321可与miR-702-5p直接结合并影响其活性;在RAPA和3-MA处理心肌细胞中,Realtime-PCR检测显示lncRNA-4321表达量与心肌自噬成正比,miR-702-5p表达量与心肌自噬成反比。结论:lncRNA-4321/miR-702-5p/Notch1可能在自噬性心肌保护中发挥重要作用。